金银花叶总黄酮抑菌作用研究

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1、金银花叶总堇酮抑菌作用研究■科技创新论文金银花叶总黄酮抑菌作用研究原增艳1宋小锋1郭庆合1,2许平辉3(1.新乡医学院三全学院，河南新乡453003；2.新乡医学院医学检验学院,河南新乡453003；3.新乡博凯生物技术有限公司，河南新乡453300)【摘要】目的：探讨金银花叶总黄酮的体外抑菌作用。方法：采用管碟法效果及最小抑菌及微量稀释法，测定不同浓度的总黄酮对不同病原微生物的抑浓度。结果：金银花叶总黄酮提取物对6种菌株均有抑制作用，金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对金银花叶总黄酮最敏感，抑菌圈直径>15mm,MIC>1;金黄色葡萄球菌的标准菌株和耐甲氧西林耐药菌株对金银花叶总黄酮的敏

2、感度无明显差异。结论：金银花叶总黄酮有一定的抑菌作用。关键词金银花叶；总黄酮；抑菌作用；最小抑菌浓度※基金项目:河南省教育厅自然科学基金(13A320863)。作者简介:原增艳(1985.05—)，女，硕士，助教，研究方向为医学微生物检验。金银花(FlosLonicerae)为忍冬科植物，其干燥花蕾或初开的花z具有清热解毒、抑菌、抗氧化等功效，是常用中药材之一山。但是金银花的叶片作为副产品，产量很高，一直作为废弃物被丢弃，没有得到充分的利用。古代医家以人体自身进行多次I缶床实践，得岀了〃花叶同效〃，明朝李时珍说〃忍冬茎叶及花功用皆同〃［2］，具有药效。在金银花叶中的总黄酮含量是花中

3、的2.78倍［3］,黄酮类化合物有非常广泛的抗菌作用［4-6］。金银花叶中总黄酮抗菌作用如何对金银花叶的开发利用至关重要，因此，本文对金银花叶中总黄酮进行粗提，初步探讨金银花叶片中的总黄酮的体外抑菌作用。1材料与方法1.1实验材料金银花叶：河南封丘，新乡博凯生物技术有限公司加工，系5月份第一茬花,将其上叶片取下,晾干，粉碎，过40目筛，备用。菌株：大肠埃希菌（ATCC25922）、金黄色葡萄球菌（ATCC25923铜绿假单胞菌（ATCC27853肺炎链球菌（ATCC49619临床分离MRSA菌株253、254。以上菌种均由新乡医学院三全学院临床微生物学与免疫学检教硏室凰共。1

4、.2实验方法1.2.1总黄酮的提取称取金银花叶粉末30g,按固液比1:10加入75%乙醇，于70°C提取1.5hz抽滤，滤渣再加入300mL75%乙醇，提取lh抽滤，合并两次提取液，减压蒸除溶剂；浓缩后提取液加适量水溶解，石油瞇脱色，取下层液体；再用乙酸乙酯萃取，每次100mL,萃取至溶剂层无色;合并上层液体，减压浓缩，浓缩后的提取物即为金银花叶的总黄酮。1.2.2菌悬液的制备将供试菌株在血平板上活化”以无菌生理盐水配制菌液”用MHA肉汤调整菌液浓度至lxl05cfu/mLo1.2.3抑菌效果的测定采用管碟法,在无菌条件下，吸取已配制好的菌悬液100

5、jL放入MH培养基上，用无菌棉

6、签涂抹涂匀，稍干后在每个平皿内等间距的放入3个无菌钢管,静止5mino以无菌生理盐水为空白对照，每孔加微孔过滤器灭菌的10mg/mL总黄酮lOOpL,将平皿盖好，37°C恒温箱内培养18-24h后，用游标卡尺测量清晰抑菌圈直径(mm),每种提取物平行6次。月市炎链球菌需CO2培养箱培养。抑菌效果判断标准参照文献［刀：以抑菌圈直径20mm为极敏，抑菌圈直径在15-20mm之间为高敏，抑菌圈直径在10-14mm之间为中敏z抑菌圈直径10mm为低敏，无抑菌圈为耐药。1.2.4最低抑菌浓度(MIC)的测定采用微量稀释法，将总黄酮用MH肉汤倍比稀释成32、16、8、4、2、1、0.5mg/m

7、L6个梯度浓度,各取lOOpL依次加入96孔板,每个浓度3个重复。每孔加入浓度为lxl05cfu/mL的菌悬液，使各孔药终浓度从依次为16、&4、2、1、0.5、0.25mg/mLo以不加菌悬液的总黄酮为阴性对照，37弋培养24h后观察结果。所有阴性对照孔培养基澄清，说明本实验方法可行。孑L底部清晰不出现菌体沉淀的最低抗菌药物浓度，即为该菌的最小抑菌浓度(MICX2实验结果2.1金银花叶总黄酮提取物对不同菌株的抑菌效果比较结果见表1,由试验结果可见,当总黄酮浓度在10mg/mL时,金黄色株ATCC25923及MRSA254、肺炎链球菌抑菌圈直径大于20mmz抑菌效果极度敏感；MRS

8、A253.铜绿假单胞菌抑菌圈直径在10-20mmz对总黄酮高度敏感；大肠埃希菌的抑菌圈直径在10-15mmz抑菌效果为中度敏感。金黄色葡萄球菌标准菌株与耐药菌株对总黄酮的敏感度无显著差异。表1金银花叶黄酮类提取物对不同菌株的抑菌效果2.2金银花叶总黄酮提取物对不同菌株的最低抑菌浓度比较结果见表2，金银花叶的总黄酮提取物对6种的菌株有不同程度的抗菌活性,其中对金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌的抑菌效果要强于大肠埃希菌及铜绿假单胞菌的抑菌活性；总黄酮对ATCC25923、MRS