多种属CpGODN诱导特异性抗体反应探究

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1、多种属CpGODN诱导特异性抗体反应探究【摘要】；目的探讨人工合成的CpGODN对不同物种的免疫刺激活性，开发具有广谱免疫刺激活性的CpGODNo方法将特定的CpGODN单独或与不同的抗原联合分别免疫鸡和小鼠，用ELISA检测不同时间鸡和小鼠特异性抗体的滴度。结果CpGODN均能诱导鸡和小鼠产生抗原特异性抗体，且抗体水平明显高于对照组(P<；O.05)o结论这种CpGODN在一定程度上具有广谱免疫刺激特性。【关键词】；CpGODN；种属特异性；疫苗Abstract：ObjectiveToinvestigatetheimmun

2、estimulationactivityofCpGoligodeoxynucleotidestodifferentspeciesanddevelopCpGoligodeoxynucleotidesthatpossessbroad-spectrumimmunestimulationactivity.MethodChickensandmicewererespectivelyvaccinatedwithCpGoligodeoxynucleotidesorsynergisticallywithdifferentantigens,andt

3、hentitersofspecificantibodyinthebloodserumsofchickensandmiceweredetectedwithELISA.ResuItsCpGoligodeoxynucleotidescouldinducethegenerationofantigenspecificantibodyinchickensandmice,andthelevelofantibodiesingroupswhichuseCpGODNasadjuvantishigherthanthatinthecontrolgrou

4、p(P&It；0.05).；ConclusionCpGODNthatwemaderestrietivelypossessesbroad-spectrumimmunestimulationactivity・Keywords：CpGODN；multispeciesspecificity；vaccine包含CpG基序的人工合成的寡核昔酸(ODN)作为免疫刺激信号可以被动物的免疫系统所识别，随后CpGODN刺激人类和多种动物产生天然的和获得性的免疫应答。CpGODN主要通过TLR9活化免疫系统，产生Thl型免疫应答。因此,CpGODN作

5、为佐剂已广泛应用于感染性疾病、肿瘤的预防和治疗［1］。但CpGODN存在种属特异性问题，这一问题限制了动物实验结论的外推性［2］o所以，寻找和开发具有广谱识别特性的CpGODN具有重要的应用价值。本文主要通过观察鸡和小鼠血清中特异性抗体的变化来评价CpGODN对不同抗原的免疫增强效果，进而确定这种CpGODN是否能够克服物种限制性这一问题。1;材料与方法1.1;材料1.1.1;动物健康1日龄小鸡，健康50日龄SPF鸡，购自广东省农科院；2月龄BALB/c小鼠，雌性，体质量20g左右，购自南方医科大学实验动物中心，合格证号：200

6、3A074o1.1.2；试剂10mg/mL猪囊虫抗原、猪囊尾黝DNA疫苗VTS76.VR1020.CpG0DN由本实验室保存[3,4],SPAHRP购自上海生物制品研究所。1.2；动物分组及免疫方案1.2.1；鸡实验组取健康1日龄小鸡，随机分成A、B、C三个组，每组20只，各组饲养条件相同。7日龄时各组处理如下：A为对照组，不作任何处理；B组滴鼻免疫VTS76疫苗(100ug/kg)；C组滴鼻免疫VTS76疫苗(100ng/kg),并同时颈部皮下注射免疫佐剂CpG0DN(100pg/kg),21日龄时B、C组按相同的处理加强免疫

7、1次。1.2.2BALB/c小鼠实验组BALB/c小鼠60只，随机分为3组，每组间隔2周免疫2次。采用肌肉注射法，将质粒DNA溶液注射到小鼠两侧股四头肌。A组注射VR1020100Pg/kg作为阴性对照；B组注射VTS76(100ug/kg)；C组注射VTS76和CpG0DN各100ug/kgo1.3；抗原特异性抗体检测96孔培养板用碳酸氢钠缓冲液(15mmol/LNa2C03,35mmol/LNaHC03,PH9.6)适当稀释的猪囊虫抗原包被，4*过夜孵育。用含Tween20的PBS(0.1mol/LPBS,0.1%Tween

8、20)洗涤3次，每次3min；每孔加入100mL经PBS(0.1mol/LPBS,1%BSA)适当稀释的待测血清，37°C孵育2hoPBS洗涤5次，每孔加入100mL.1:40稀释的SPAHRP,37°C孵育2h。PBS洗涤5次，每孔加入100mLTMB底物(含