利用石蜡切片对小鼠肝脏组织器官细微结构的观察

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1、摘要：本文采用石蜡永久制片和光学显微摄像的方法对经过环磷酰胺处理过的小鼠肝脏的显微结构进行了研究，分析环磷酰胺对小鼠肝脏的显微结构产生的影响。结果表明，一定剂量的环磷酰胺对肝脏具有损伤作用。关键词：小鼠肝脏石蜡切片环磷酰胺(Cyclophosphamide,Cp)是人工合成的氮芥类烷化剂。可以抑制细胞增殖，非特异性杀伤抗原敏感性小淋巴细胞，限制其转化为免疫母细胞，可以作为细胞周期非特异性广谱抗肿瘤药，被广泛用于治疗急慢性淋巴细胞性白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等；但同时可以引起剂量依赖性肝损伤的副作用——原因可能是环磷酰胺主要代谢物丙烯对肝脏有毒副作用，能引起

2、肝细胞坏死，肝小叶中心充血，同时伴有氨基转移酶含量升高的现象。1材料与仪器1.1实验材料小白鼠1.2实验仪器：镊子、毛笔、蜡杯、溶蜡箱、酒精灯、切片机、载玻片、盖玻片、染色缸、光学显微镜。1.3试剂：中性福尔马林固定液、各浓度酒精、二甲苯、石蜡、伊红染液、苏木精染液、加拿大树胶2实验方法2.1取材用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，即可使颈椎脱臼，小白鼠瞬间死亡。取肝组织。2.2固定将小鼠肝脏块投入中性福尔马林固定液中固定。2.3脱水将组织经各浓度酒精各1h，95%、100%的酒精各两次，每次30min。2.4透明将组织

3、块置于酒精二甲苯混合液中15min，再将组织块置于二甲苯中透明两次，每次10min。最后将组织块置于二甲苯石蜡混合液中20min。2.5透蜡将组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，共三次，前两次45min，第三次30min。2.6包埋向纸盒中倒入少许石蜡，将组织块用镊子夹取到纸盒中，放入盛有冷水的盆中使其凝固。2.7切片右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，当切成的蜡带到一定长度时，将蜡带放在纸上。2.8贴片、展片选取蜡带放置在载玻片上。将载玻片放置在机器上进行展片，待蜡带完全展开时将载玻片拿下，放入盒内。2.9脱蜡复水将石蜡切片经二甲苯Ⅰ脱蜡

4、20min，二甲苯Ⅱ脱蜡10min，然后放入各级酒精溶液中各2min，蒸馏水中2min。2.10染色将石蜡切片在苏木精染液中浸40min，然后蒸馏水涮洗几次至发蓝（约2min），镜检。2.11脱水Ⅰ、复染、脱水Ⅱ将镜检合格的石蜡切片依次在各级酒精中浸2min，再在伊红水溶液浸二十至三十秒，再依次在95%、纯酒精Ⅰ、纯酒精Ⅱ中各浸3min。2.12透明将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3min。2.13封藏：中性树胶封存将载玻片取出，在切片中央滴一滴树胶，用镊子盖上盖玻片。3小鼠肝脏石蜡切片观察见下图：石蜡切片（4倍）石蜡切片（10倍）石蜡切片（40倍）4石蜡切片结果

5、分析在观察到的小鼠肝组织中，细胞核被染为蓝色，细胞质被染为红色，上述图片可以看出本实验较为成功，细胞核细胞质色差明显5结论环磷酰胺进入体内后在肝脏中经微粒体功能氧化酶转化成醛磷酰胺，进而分解成酰胺氮芥及丙烯醛，对肿瘤细胞产生抑制作用，是临床上常用的抗肿瘤药物；但在环磷酰胺转化过程中，由于肝脏的氧化应激作用会导致肝脏损伤。关于环磷酰胺毒副作用的研究对临床抗肿瘤治疗提供了更多的参考资料，对医学的发展有着重要的意义。