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时间:2018-04-25
《植物组织石蜡切片的制作》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1.熟练掌握石蜡切片的方法。2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物的内部结构奠定基础。3.学会植物内部结构的比较研究方法。二、实验器具与试剂1.器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。2.试剂10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。三、实验材料幼嫩植物各部分,根据季节选择材料。四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面,用旋转切片机切片,可以切出
2、很薄的切片。凡是精细的工结构,大都用石蜡切片。全都过程如下:1.固定2.洗涤3.脱水与硬化4.脱酒精2.封埋6.切片7.粘片8.脱蜡9.染色10.脱水11.透明12.胶封(一)固定1.固定的意义:固定就是用药品把细胞杀死,使细胞的原生质凝固,死后不发生变化,尽可能保持原来的结构以供我们观察。良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色。2.固定液的种类:固定液的种类很多,根据配制成分可划分为:(1)简单固定液:以一种化学药品配制的固定液。常用的简单固定液有:A.酒精即乙醇,用作固定液,常用纯酒精或95%酒精。酒精穿透
3、力强,固定时间常在1小时以内。高浓度酒精有使材料收缩的作用。70%的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普通酒精即95%的酒精,绝不可用纯酒精。酒精为还原剂,不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。酒精可使核酸,蛋白质及肝醣等发生沉淀,但能溶解脂肪及拟脂。B.福尔马林即甲醛,具强烈刺激性的气味,纯净的甲醛,为无色透明液体。固定用的浓度为4-10%甲醛也是强还原剂。不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。经固定后,材料变硬,通常不引起皱缩,但随后经过他种药剂处理时,就每每出现皱缩。所以甲醛一般不单独作固定,而与其他液体混合使用。C.醋酸:为无色透明的液体,刺激性极强,冷则凝结成冰,故又
4、叫冰醋酸。醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液,所用浓度为0.2~5%,也常与其他固定剂配合使用。醋酸穿透性很强,单独使用,有使原生质膨胀的作用,故常与酒精,甲醛等合用,醋酸为固定染色体的优良固定液,因此固定染色体的固定液中,几乎都含有醋酸。(2)混合固定液:由几种药剂,适量配制而成。常用的有下列几种:A、F.A.A固定液(又称万能固定液):[用途]这个固定液在植物研究上,应用最多,为植物组织最常用的固定液。固定时间,不受限制,短为24小时,长可延至数月或数年。野外工作,非常便利。并且固定的材料,不妨碍染色,但对染色体的固定不佳。材料固定后,用50%酒精洗涤数次。[配法]50
5、%或70%酒精90毫升冰醋酸5毫升福尔马林5毫升柔软材料用50%酒精,坚硬材料用70%酒精配制。B、卡尔诺氏(Carnoy's)固定液[用途]此液作组织细胞的固定,有极快的渗透力,固定根尖和花药只需40-60分钟。固定后用95%酒精冲洗,在组织不能立即处理时,需转入70%酒精中保存。配法有两种:C.纳瓦兴(Navaschjn's)固定液[用途]此液在植物制片上应用甚广,是细胞学及组织学上一种优良的固定液。此液原来的配方已很少应用,现所用的都是改良液,且种类很多,如材料较柔嫩,含水量较多,可用配方I、Ⅱ;材料较坚硬,含水量较少,可用Ⅳ、V配方,其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适
6、用。为了使用方便,常分别配成甲、乙两种基液,用时临时等量配合。固定时间为12-24小时,固定后用70%酒精洗涤数次。(二)洗涤材料固定后,药剂继续留在组织中,易使组织破坏,必须用水或酒精洗去。用什么去洗,可根据三条原则:1.凡用水溶液配制的固定液,特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液,一律用水洗。2.凡用酒精配制的固定液,一律用同浓度的酒清洗。3.如固定液中含有苦味酸.在70%酒清中停留稍久时,可除去黄色。如用升汞固定的材料,在洗涤时,须加碘液,可除去汞的结晶。(三)脱水与硬化材料洗涤后,其中含水,水与石蜡不能混合,必须洗去。去水用酒精,材料由水入酒精中,不能操之过急,须由低度
7、酒精渐至高度酒精。通常由30%、50%、70%、80%、90%,每次须经半小时,材料大的,时间须延长。若暂时不能埋蜡、材料可放在70%酒精中保存,经久不坏。在高度酒精中,不能过久.因酒精能使材料硬化,过久则材料由硬而脆,切时易于粉碎。(四)脱酒精材料脱水后,材料中全含酒精,酒精与蜡也不能混合,仍须除去。脱酒精通常用二甲苯,材料由酒精入二甲苯,最好也渐次进行,先经纯酒精二甲苯混合液,再入纯二甲苯中,纯二甲苯须换一、二次才行。时间每次约半小时。二甲苯不仅脱去酒精,并且透明,所以又叫透明剂。(五)埋蜡埋蜡是把材料封埋在石
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