植物组织石蜡切片的制作

《植物组织石蜡切片的制作》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、植物组织石蜡切片的制作一、实验目的1．熟练掌握石蜡切片的方法。2．掌握永久制片的制作过程，为研究植物的内部结构奠定基础。3．学会植物内部结构的比较研究方法。二、实验器具与试剂1．器具石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。2．试剂10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。三、实验材料幼嫩植物各部分，根据季节选择材料。四、实验内容与方法石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面，用旋转切片机切片，可以切出

2、很薄的切片。凡是精细的工结构，大都用石蜡切片。全都过程如下：1．固定2．洗涤3．脱水与硬化4．脱酒精2．封埋6．切片7．粘片8．脱蜡9．染色10．脱水11.透明12．胶封（一）固定1．固定的意义：固定就是用药品把细胞杀死，使细胞的原生质凝固，死后不发生变化，尽可能保持原来的结构以供我们观察。良好的固定剂，应是穿透力强，使细胞立刻致死，原生质全部凝固；不发生任何变形，增强折光率，并且不妨碍染色。2．固定液的种类：固定液的种类很多，根据配制成分可划分为：(1)简单固定液：以一种化学药品配制的固定液。常用的简单固定液有：A．酒精即乙醇，用作固定液，常用纯酒精或95％酒精。酒精穿透

3、力强，固定时间常在1小时以内。高浓度酒精有使材料收缩的作用。70％的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普通酒精即95％的酒精，绝不可用纯酒精。酒精为还原剂，不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。酒精可使核酸，蛋白质及肝醣等发生沉淀，但能溶解脂肪及拟脂。B．福尔马林即甲醛，具强烈刺激性的气味，纯净的甲醛，为无色透明液体。固定用的浓度为4-10％甲醛也是强还原剂。不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。经固定后，材料变硬，通常不引起皱缩，但随后经过他种药剂处理时，就每每出现皱缩。所以甲醛一般不单独作固定，而与其他液体混合使用。C．醋酸：为无色透明的液体，刺激性极强，冷则凝结成冰，故又

4、叫冰醋酸。醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液，所用浓度为0.2～5％，也常与其他固定剂配合使用。醋酸穿透性很强，单独使用，有使原生质膨胀的作用，故常与酒精，甲醛等合用，醋酸为固定染色体的优良固定液，因此固定染色体的固定液中，几乎都含有醋酸。(2)混合固定液：由几种药剂，适量配制而成。常用的有下列几种：A、F.A.A固定液(又称万能固定液)：[用途]这个固定液在植物研究上，应用最多，为植物组织最常用的固定液。固定时间，不受限制，短为24小时，长可延至数月或数年。野外工作，非常便利。并且固定的材料，不妨碍染色，但对染色体的固定不佳。材料固定后，用50％酒精洗涤数次。[配法]50

5、％或70％酒精90毫升冰醋酸5毫升福尔马林5毫升柔软材料用50％酒精，坚硬材料用70％酒精配制。B、卡尔诺氏(Carnoy's)固定液[用途]此液作组织细胞的固定，有极快的渗透力，固定根尖和花药只需40-60分钟。固定后用95％酒精冲洗，在组织不能立即处理时，需转入70％酒精中保存。配法有两种：C．纳瓦兴(Navaschjn's)固定液[用途]此液在植物制片上应用甚广，是细胞学及组织学上一种优良的固定液。此液原来的配方已很少应用，现所用的都是改良液，且种类很多，如材料较柔嫩，含水量较多，可用配方I、Ⅱ；材料较坚硬，含水量较少，可用Ⅳ、V配方，其中配方Ⅱ对植物胚胎学制片特别适

6、用。为了使用方便，常分别配成甲、乙两种基液，用时临时等量配合。固定时间为12-24小时，固定后用70％酒精洗涤数次。(二)洗涤材料固定后，药剂继续留在组织中，易使组织破坏，必须用水或酒精洗去。用什么去洗，可根据三条原则：1．凡用水溶液配制的固定液，特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液，一律用水洗。2．凡用酒精配制的固定液，一律用同浓度的酒清洗。3．如固定液中含有苦味酸．在70％酒清中停留稍久时，可除去黄色。如用升汞固定的材料，在洗涤时，须加碘液，可除去汞的结晶。（三）脱水与硬化材料洗涤后，其中含水，水与石蜡不能混合，必须洗去。去水用酒精，材料由水入酒精中，不能操之过急，须由低度

7、酒精渐至高度酒精。通常由30％、50％、70％、80％、90％，每次须经半小时，材料大的，时间须延长。若暂时不能埋蜡、材料可放在70％酒精中保存，经久不坏。在高度酒精中，不能过久．因酒精能使材料硬化，过久则材料由硬而脆，切时易于粉碎。（四）脱酒精材料脱水后，材料中全含酒精，酒精与蜡也不能混合，仍须除去。脱酒精通常用二甲苯，材料由酒精入二甲苯，最好也渐次进行，先经纯酒精二甲苯混合液，再入纯二甲苯中，纯二甲苯须换一、二次才行。时间每次约半小时。二甲苯不仅脱去酒精，并且透明，所以又叫透明剂。（五）埋蜡埋蜡是把材料封埋在石