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1、实验六实验室环境和人体表面微生物的检查一目的要求1.证明实验室环境与体表存在微生物。2.比较来自不同穿梭与不同条件下的微生物的数量和类型。3观察不同类群微生物的菌落形态特征。4.体会无菌操作的重要性。二实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取白不同來源的样品接种于培养基上,在适宜温度下培养，广2d内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行反之，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都冇它自己的特点，例如菌落的人小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，
2、颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养來检查环境中细菌的数量和类型。三实验材料1•培养基牛肉膏蛋白腺琼脂平板2.无菌水，火菌棉签（装在试管内），接种环、试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔,废物缸。四操作步骤每组在“实验室”和“人体”两人部分中各选择一个内容作实验，或由教师指定分配,最后结果供全班讨论。1.写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、FI期，本次实验还要写上样品來源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当屮，以免影响观察结果。培养皿的记号一
3、般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察2个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。2.实验室细菌检查（1）空气将一个肉膏蛋口月东琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去血盖，使琼脂培养基表而暴露在空气中；将另一肉膏蛋口腺琼脂平板放在无菌室或吾人走动的其他实验室,移去皿盖。lh后盖上2个皿盖。（2）实验室和门的旋钮①用记号笔在皿底外面中央画一•直线，再在此线中间处画一垂直线，如图11—1。②取棉签左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图II—2,B）,将管口很快地通过煤气灯（或洒精
4、灯）的火焰，烧灼管口；轻轻的倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心的取出（图II—2,C）。放I叫棉塞（或试管帽）（图II-2,D）,并将空试管放在试管架上。③弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞（或试管帽）并烧灼管口，将棉塞插入水中，再提出水而，在管壁上挤压一下以出去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放冋棉塞（或试管帽），并将灭菌水试管放在试管架上。④取样将湿棉签在实验台上面或门旋纽上擦拭约2ci『的范围。⑤接种按图II-3A在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下（图
5、II-3B）,立即闭合皿盖。并按图II-2,E和F,将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放凹试管架。①划线另取接种环在火焰上火菌，入图II-4,先将环端烧热（图II-4A）,然后将接种环提起垂直防在火焰上（图II-4,B）,以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养II1L的部分，再移向环端，如此，如此很快地来回通过火焰次数（图11-4,C）。也可用一种电加热灭菌器（图11-5）,将接种环（或针）伸进电热器中心内儿秒钟，达到灭菌的目的。此方法简便，
6、同时可以防止火焰灼烧吋被烧物的溅出。左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并已冷却的接种环（可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫），通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直至平板的一半处（图II-3,C）。接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会划破琼脂。闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷却。接种环通过前面划的线再在琼脂的另一半，按图II-3,D从上向下來回划线至1/2处。烧灼接种环，转动平板，按图II-3,E,划最后1/4,立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。整个划线
7、操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。1.人体细菌的检杳⑴手指（洗手前与洗手后）①分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、FI期各项在每次写标签时是必不可少的）。②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板表面，轻轻的来回划线，盖上皿盖。③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来冋移动，盖上皿盖。（2）头发在揭开血盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然示盖上祖盖。（3）咳嗽将去皿盖的琼脂平板放在离口约6~8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖
8、。⑷鼻腔①按照实验台检查法的步骤②和③，取出棉签，并将具弄湿。②用湿棉签在鼻腔内滚动数次。③按实验台检查法的步骤⑤和⑥，接种与划线，然后盖上皿盖。2.将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，放37°C培养箱，培养广2d。3.结果记录方法（1）菌落计数在划线的平板上，如
