实验一 实验室环境和人体表面的微生物检查

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时间:2018-07-26

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1、实验1实验室环境和人体表面的微生物检查一、实验目的1、证实实验室环境和人体表面存在微生物。2、观察不同类群微生物的菌落形态特征。3、比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。4、体会无菌操作的重要性。二、基本原理  通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上,经过生长繁殖形成几百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分,当取自不同来源的样品接种于培养基上,在37℃温度下培养,1—2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖,形成一个可见的细胞群体的集落,称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此,可

2、通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。三、实验器材1、培养基牛肉膏蛋白胨培养基2、溶液和试剂无菌水3、仪器和其他用品平板,试管,灭菌棉签(装在试管内),试管架,漏斗,止水夹,煤气灯或酒精灯,记号笔,接种环,标签纸,废液缸等。四、实验操作1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备:(1)称量:准确称取牛肉膏1.8克、蛋白胨6.0克、Nacl3.0克放入烧杯中。(2)熔化:在上述烧杯中加入少于所需的水量(所需水量为600ml),用玻璃棒搅匀,补充水到所需的总体积600ml。(3)调pH:用1mol/LNaOH和1mol/LHCl进行调节,直至溶液pH达到7.0~7

3、.2。(4)分装:将其中300ml溶液装入500ml三角瓶中,向三角瓶中加入6.0克琼脂,向烧杯剩余液体中加入6.0克琼脂,在石棉网上加热烧杯,使琼脂溶解,将烧杯中溶液分装到10支试管中,每支试管中加入体积为试管总体积的1/5左右。(5)加塞:在三角瓶口上塞上棉塞,防止外界微生物进入造成污染。(6)包扎:加塞后,在棉塞外包一层牛皮纸,将全部试管用麻绳捆好(还有一支装有无菌水的试管),同样的方法把三角瓶包好,扎好。用记号笔注明培养及名称、组别、配制日期。(7)灭菌:将上述培养基以0.1MPa,121℃,90min高压蒸汽灭菌。(8)搁置斜面:将灭菌的试

4、管培养基冷却至50℃左右,将试管口端搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管的总长的一般为宜。2、倒平板:点燃酒精灯,右手握住三角瓶底部,用左手小指将棉塞夹住,拔出,随之将瓶口边缘在火焰上过一下,杀死粘在瓶口外的杂菌。左手拿起一套平皿,用无名指和小指托住平皿底部,用中指和大拇指夹住皿盖并开启一缝,恰好能让三角瓶伸入,随后倒出培养基。倒入15~20ml培养基,铺满整个皿底。盖上皿盖,置水平位置待凝。重复上述操作,共倒平皿18个。3、微生物采集:(1)空气将6个平板在实验室环境中移去皿盖,使琼脂培养基表面暴露在空气中。5min后,将其

5、中三个盖上皿盖,分别贴上标签,注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号,10min后,将剩余三个盖上皿盖,分别贴上标签,注明日期、组别、样品来源、暴露时间和编号。(2)桌面用无菌水湿润棉签,用棉签在实验台面擦拭约2cm2的范围,在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝,将棉签伸入,在琼脂表面接种,之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿,分别贴上标签,注明日期、组别、样品来源和编号。(3)洗手前用无菌水湿润棉签,用棉签在手表面擦拭,在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝,将棉签伸入,在琼脂表面接种,之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿,分别贴上标签,注明日

6、期、组别、样品来源和编号。(4)洗手后用肥皂和刷子用力刷手,在水流中冲洗干净,干燥后用无菌水湿润棉签,用棉签在手表面擦拭,在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝,将棉签伸入,在琼脂表面接种,之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿,分别贴上标签,注明日期、组别、样品来源和编号。(5)硬币用无菌水湿润棉签,用棉签擦拭硬币表面,在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝,将棉签伸入,在琼脂表面接种,之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿,分别贴上标签,注明日期、组别、样品来源和编号。2、微生物培养:将每一组(3个)中编号为1的平板放在28℃环境培养箱中培养,将编号

7、为2和3的平板放在37℃的环境培养箱中培养,时间为一周。3、菌落特征描述方法:(a)大小:大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下,再决定大、中、小的标准,或由教师指出一个大小范围。(b)颜色:黄色、金黄色、白色、乳白色、灰色、红色、粉红色等。(c)干湿:干燥、湿润、粘稠。(d)形态:圆形、不规则等。(e)边缘:整齐、不整齐等。(f)表面:高度扁平、隆起、凹下。五、实验报告1、结果(1)菌落描述样品①、③样品②、④样品⑤样品⑥样品来源菌落描述菌落数记录人①1-4-空10-3-37℃大、白、干、圆、整齐、扁平3李龙②1-4-空5-2-37

8、℃小、黄、干、圆、整齐、扁平4商倩倩③1-4-空10-3-37℃中、淡黄、湿、圆、整齐、隆起1泮力菁④1-4

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