实验二实验室环境和人体表面微生物的检查

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1、实验二实验室环境和人体表而微生物的检查生科15.2周罡201500181104【实验目的】1.证实实验室环境与人体表面存在微生物。2.体会无菌操作的重要性。3.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范闱，学习商压蒸汽灭菌的操作技术。4.观察不同类群微生物的飽落形态特征。5.比较不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。6.掌握倒平板的方法和几种常川的分离纯化微生物的基本操作技术。【实验原理】通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上,经过生长繁殖形成儿百万个聚集在一起的肉眼可见的菌落。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基

2、上，在37"C温度下培养，1一2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称力菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点。因此，可通过平板培养來检查环境中细菌的数量和类型。每一种细菌所形成的菌落都有它向己的特点，例如菌落的大小，表而干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，歯落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类。值得指出的是从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测

3、个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种鉴定方能得到。从浞杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为分离与纯化。【实验器材】1.溶液和试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCLNaOH溶液、HCI溶液2.仪器和其他用品试管，培养皿，500mL锥形瓶，500mL烧杯，500mL量简、玻璃棒、胶头滴管、电子秤？、药匙、棉花、纱布、牛皮纸、记号笔、橡皮筋、纸绳、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸【实验步骤】1.配制300mL牛肉膏培养基(1)在烧杯屮加入300mL蒸馏水(2)依次称ft0.9g牛肉膏，3.0g蛋白膝，1.5gNaC

4、I放入烧杯屮(3)待其溶解后，调节pH，使其pH值达到7.4〜7.6(4)向烧杯中加入6.0g琼脂粉，并将配好的培养基倒入锥形瓶中，并塞上棉塞，瓶LI及棉塞用牛皮纸包好2.高温蒸汽灭菌在3支试管中加入蒸馏水，用棉塞塞好，3支试管口用牛皮纸包在一起。把10套培养皿包在一起，另外5套培养基包在一起。将包好的试管、培养皿、锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅内，120°C灭菌20min。3.倒平板培养基从高压蒸汽灭菌锅取出后，待其冷却到5CTC左右。点燃洒精灯，右手持盛培养基的锥形瓶，用左手将瓶塞轻轻地拔出，，在酒精灯上烧一下，瓶口保持对着火焰。左手持培养皿并将皿盖在

5、火焰旁打开，一缝，迅速倒入培养基15~20mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养基底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。1.微生物的接种(1)空气将6个平板在实验室环境屮移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气屮。5min后，将其中三个盖上皿盖，分别贴上标签，标号分别为4-5-空-5'-l-37°C、4-5-空-5'-2-37°C、4-5-空-5'-3-28°C,lOmin后，将剩余三个盖上皿盖，分别贴上标签，标号分别为4-5-空-1O'-1-37°C、4-5-空-10'-2-37'C、4-5-空-10'-3-28'C(2)桌而用无菌水湿润

6、棉签，用棉签在实验台面擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，标号分别为4-5•桌-1-37°C、4-5-桌-2-37°C、4-5-桌-3-28°C(3)手用无菌水湿润棉签，用棉签在手上擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿幵启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共做三套相同平皿，分别贴上标签，标号分别为4-5•手-1-37°C、4-5-手-2-37°C、4-5-手-3-28°C(4)自选用无菌水湿润棉签，用棉签分别在

7、衣服表而、手机屏®表而、1元纸币上擦拭约2cm2的范围，在火焰旁用左手拇指和中指将平皿开启成一缝，将棉签伸入，在琼脂表面接种，之后立即闭合皿盖。共三套平皿，分别贴上标签，标号分别为4-5-衣服-l-37'C、4-5-手机-2-37°C、4-5-纸fp-3-28°C2.培养将标号为37°C的培养皿放在37°C的环境培养箱屮培养，将标号为28°C的培养皿放在28°C的环境培养箱中培养，吋间为一周。3.斜面与平皿制做(1)在烧杯中加入3OOmL蒸馏水(2)依次称量O.9g牛肉膏，3.0g蛋白胨，1.5gNaCI放入烧杯屮(3)待其溶解后，调节pH，使其pH

8、值达到7.4〜7.6(4)在锥形瓶中加入3.0g琼脂粉，将15OmL配制好的培养基倒入锥形瓶中(5)往烧杯中