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1、葡萄糖注射液无菌检查方法学验证1、样品和仪器1.1样品：葡萄糖注射液1.2仪器:IITY-601集菌仪全封闭集菌培养器1.3培养基：硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆陈液体培养基1.3••阳性对照菌：金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003],第2代大肠埃希菌菌[CMCC(B)44102],第2代枯草芽泡杆菌[CMCC(B)63501],第4代生泡梭菌[CMCC(B)64941],第4代白色念珠菌[CMCC(F)98001],第2代黑曲霉[CMCC(F)98003],第4代2、菌液制备2.1金黄色葡萄球菌菌悬液的制备接种金黄色葡萄球菌的
2、新鲜培养物至胰酪大豆腺液体培养基中，30-359培养24小时，取lml,加入9mlpH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液中，10倍稀释至1(T约为10〜100cfu/ml备用。2.2大肠埃希菌菌悬液的制备接种大肠埃希菌的新鲜培养物至胰酪大豆月东液体培养基中,30-35°C培养24小时，取lml,加入9mlpII7.0氯化钠-蛋白月东缓冲液屮，10倍稀释至IO"约为10〜100cfu/ml备用。2.3枯草芽泡杆菌菌悬液的制备接种枯草芽泡杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆腺液体培养基中,30-35°C培养24小时,取lml,加入9mlpH7.0氯化钠
3、-蛋白陈缓冲液中，10倍稀释至10’约为10〜100cfu/ml备用。2.4生孑包梭菌菌悬液的制备接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35°C培养24小时,取lml,加入9mlpH7.0氯化钠-蛋白月东缓冲液中，10倍稀释至10"约为10〜100cfu/ml备用。2.5白色念珠菌菌悬液的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25°C培养24小时，取lml,加入9mlpH7.0氯化钠-蛋口月东缓冲液中，10倍稀释至KT'约为10〜100cfu/ml备用。2.6黑曲霉也子悬液的制备将黑曲霉斜
4、而的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜而培养基上，20-25°C培养7天，加入4ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液中，洗下泡子,吸出抱子液,取此抱子液lml加入9ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0氯化钠-蛋白腺缓冲液中10倍稀释至10一"约为10〜100cfu/ml备用。3、活菌计数分别取上述六种菌悬液lml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。2.1—2.4四种菌各加入胰酪大豆腺琼脂培养基18ml,凝固，倒置培养48小时，2.5-2.6两种菌各加入沙氏葡萄糖琼脂培养基凝固，倒置
5、培养72小时。计数。阳性对照菌菌悬液记数结果菌种代数稀释度取样量(ml)菌数(cfu/ml)金黄色葡萄球菌210-616360人肠埃希菌2IO"17167枯草芽砲杆菌410诗16266生沦梭菌4ICT?17175白色念珠菌210-516872黑曲霉4E150424、薄膜过滤法的方法验证取少量冲洗液润湿全封闭集菌器滤膜，取供试品5瓶滤过，在最后一瓶供试品中加入小于lOOcfu的试验菌菌悬液，过滤，如此共制备6管带菌集菌器，分别加入硫乙醇流体培养基或胰酪大豆陈液体培养基；另取5瓶滤过，不加菌悬液作为阴性对照，制备2管，加入硫乙醇酸盐流
6、体培养基或胰酪大豆月东液体培养基lOOmlo另取装有同体积硫乙醇酸盐流体培养基或月夷酪大豆月东液体培养基的全封闭集菌器，加入等量的各试验菌菌悬液，作为阳性对照。按各规定温度培养5天。具体方法验证及结果见下表。验证实验结果1批菌种纟日呷硫乙醇酸盐流体培养荫种甸胰酪大矍液体培基ESC20-25C金黄色葡萄球菌日期12345匚伍人秒日期12345对照组+++++曰詈'坏对照组一++++试验组+++++、试验组-++++大肠埃希对照组+++++黑曲霉对照组-++++菌试验组+++++试验组-++++生孑包梭菌对照组+++++枯草芽抱对照组
7、-++++试验组十++++杆菌试验组-+十++阴性对照阴性对照2批金黄色葡日期12345白色念珠日期12345萄球菌对照组+++++菌对照组-++++试验组+++++试验组-++++大肠埃希对照组+++++黑曲霉对照组-++++菌试验组+++++试验组-++++生他梭菌对照组+++++枯草芽抱对照组-+十++试验组+++++杆菌试验组-++++阴性对照阴性对照菌种胰酪大豆月东液体培组别养基20-25°C3批金黄色葡日期12345白色念珠日期12345萄球菌对照组+++++菌对照组-++++试验组+++++试验组-++++大肠埃希对
8、照组+++++黑曲霉对照组-++++菌试验组+++++试验组-++++生他梭菌对照组+++++枯草芽抱对照组-+十++试验组+++++杆菌试验组-++++阴性对照阴性对照菌种胰酪大豆陈液体培组别养基20-25°C州口“硫乙醇酸盐流体培养期袖爼力」基
