氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证

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1、10.3.6.1试验目的：对氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证及对供试晶进行无菌检查。10.3.6.2试验仪器及药品：10.3.62［试验仪器：HT-1300超净工作台苏净集团苏州安泰空气技术有限公司生化培养箱广东医疗器械厂HT^III智能集菌器杭州高得更疗器械有限公诃KSF集菌培养器杭州高得医疗器械冇限公司10.3.6.2.2供试品和试剂：10.3.6.2.2.1培养基：硫乙醇酸盐流体培养基（用于好氧菌和厌氧菌）、改良马丁培养基（用于真菌）、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基（均由中国生物制品检定所提供）1

2、0.3.6.2.2.2菌种：均rh中国牛物制品检定所提供菌种名称菌株编号对应培养基金黄色葡萄球菌StaphylococcusaureusCMCC（<>26003硫乙醇酸盐流体培养基铜绿假单胞菌PseudomonasaeruginosaCMCC（:，10104硫乙醇酸盐流体培养基枯草芽抱杆菌BacillussubtilisCMCC（^63501硫乙醇酸盐流体培养基生ftl梭菌ClostridiumsporogenesCMCC（64961硫乙醇酸盐流体培养基白色念珠菌CandidaalbicansCMCC（F）98001改

3、良马丁培养基黑曲零菌AspergillusnigerCMCC（F）98003改良马丁培养基10.3.6.2.2.3供试晶：氧氟沙星葡萄糖注射液（本公司口制）规格：100ml：0.2g,批号：0502011、0502021>050203110.3.6.2.2.4稀释液、冲洗液及溶解液的制备：0.1%蛋白曲冰溶液取蛋白月东1.0g,加水1000ml,微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2,分装，灭菌。0.9%无菌氯化钠注射液取0.9%氯化钠注射液（500ml/瓶）1瓶，灭菌保存。10.3.6.3培养基的系统适用性检查1

4、0.363.1无菌性检查每批培养基随机取6瓶，在各自条件下培养14天，逐口观察，结果均无好氧菌、厌氧菌和真菌牛长，符合无菌耍求。10.3.6.3.2灵敏度检查10.3.6.3.2.1菌液制备10.3.6.3.2.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，33±0.5°C培养18h,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成1：103、1：104、1：105、1：106>1：107,再分別取1ml于培养基中，在33°C±0.5牛化培养箱培养48h,计数，选择1ml含菌数少于10Ocfu（菌落

5、形成单位）的菌悬液；10.3.6.3.2.1.2接种生泡梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，33±0.5°C培养24h,接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基屮，26±0.5°C培养48h,上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成1：103.1：104.1：105、1：106、1：107,再分別取1ml于培养基中，分别在33°C±0.5生化培养箱48h和26±0.5°C生化培养箱培养72h,计数，选择1ml含菌数少于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液；10.3.6.3.2.1.3接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改

6、良马丁培养琼脂斜而培养基上，26±0.5°C培养7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后吸出抱子悬液至无菌试管中，用0.9%的无菌氯化钠溶液制成每1ml含孑包子数小于100cfu（菌落形成单位）的砲子悬液。10.36322培养基接种：在无菌条件下，依照（中国药典2005年版二部附录XIH）无菌检查法项下具体步骤操作，细菌培养3天，真菌培养5天，逐日观察。结果见下表。培养基的灵敏度试验结果培养基菌种培养天数结果乙醇酸盐流体培养基（12ml/支）金黄色衞萄球菌3牛长良好3生长良好铜绿假单胞菌3生长良好3生长

7、良好枯草芽砲杆菌3生长良好3生长良好生抱梭菌3生长良好3生长良好空白对照3无菌牛长改良马丁培养基（9ml/支）白色念珠菌5牛长良好5生长良好黑曲霉菌5生长良好5生长良好空口对照5无菌生长结果表明：培养基的灵敏度符合规定。10.3.6.4方法验证试验10.3.6.4.1菌液制备：同灵敏度试验试验项下菌液制备。10.3.6.4.2方法及结果检查方法：用15ml0.1%蛋白腺水溶液润湿滤膜，然后取氧氟沙星葡萄糖注射液30支，通过集菌培养器的滤器过滤，均分在6个滤器中，每个滤器再用0.1%蛋白月东水溶液100ml/次冲洗，共5

8、次，衣最后一次的冲洗液屮分别加入小于100cfu的试验菌，过滤。根据试验菌的要求将硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基加入滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照组。按规定培养3天。各批样品同法操作。结果见下表。菌种批号出现微生物生长的最长时间（天）供试品组阳性对照组金黄色葡萄球菌05020112050202