盐酸左氧氟沙星注射液无菌检查方法验证

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1、盐酸左氧氟沙星注射液无菌检查方法验证摘要：目的确认盐酸左氧氟沙星注射液在所用的试验条件下无抑菌活性并确保测定方法的可靠性。方法薄膜过滤法。结果阳性对照管生长良好，阴性对照管无菌生长，与对照管比较，试验组各管中各生长菌均生长良好，说明样品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用。结论盐酸左氧氟沙星注射液的无菌检查，可采用薄膜过滤法，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液冲洗，冲洗量900mL,每次lOOmLo关键词：盐酸左氧氟沙星；薄膜过滤法；无菌检查；验证1样品与试验仪器1.1样品：盐酸左氧氟沙星注射液(河北长天药业有限公司，规格2nd：0.lg)1・2试验仪器：见表1表1试验仪器2菌种与培养基2.

2、1菌种：均由中国药品生物制品检定所提供大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］、枯草芽抱杆菌［CMCC(B)63501］、生抱梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］2・2培养基：均由北京三药科技开发公司提供硫乙醇酸盐流体培养基:100419改良马丁培养基:100512营养肉汤培养基:101215改良马丁琼脂培养基:101028营养琼脂培养基:100610玫瑰红钠琼脂培养基：0911183试验方法3.1菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、

3、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，接种生砲梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马J•培养基中，接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上。1.1.1分别取经33°C培养24小时的人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、生也梭菌的营养肉汤培养物51,用0.9%无菌氯化钠溶液，逐管10倍量逐级稀释至1ml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。3.1.2取经25°C培养24小时白色念珠菌的改良马丁培养物lml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于lOOcfu的菌悬液。3.1.3取经25°C培养7天的黑曲霉的

4、改良马丁琼脂斜面培养物，加5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱抱子，吸出抱子悬液至无菌试管中，取此砲子液1ml,用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于lOOcfu的菌悬液。3.2菌悬液菌落计数取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孑包杆菌适宜稀释度的菌悬液各lnil,分别注入培养皿中，立即倾注20ml温度不超过45°C的营养琼脂培养基，凝固后倒置平皿，33°C,72小时培养后计数。取生砲梭菌适宜稀释度的菌悬液lnil注入100ml硫乙醇酸盐流体培养基的厌氧层33°C,72小时培养后计数。取白色

5、念珠菌菌悬液，黑曲霉菌悬液各lml,分别注入培养皿中，立即倾注20ml温度不超过45°C的玫瑰红钠琼脂培养基，25°C,120小时培养后计数。培养结果见表2。3.3培养基灵敏度实验培养基无菌性检查每批培养基随机取配制及灭菌的培养基各5支，培养14天，结果见表3。表2菌悬液菌落计数结果表3无菌性检查结果取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于lOOcfu的金黄色衙萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、生砲梭菌各2支，另一支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于lOOcfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另一支不接种作为空白对照，培养5天。

6、逐日观察结果见表4。空白对照管无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，判断该培养基的灵敏度检查符合规定。表4培养基灵敏度实验检查结果3.4检验方法取供试品30支，用无菌检测系统(HTY-IIIA型集菌仪)和一次性全封闭集菌培养器(KDGB330)全量过滤，过滤后用PII7.0无菌氯化钠-蛋口月东缓冲液冲洗滤膜，每次每筒100ml,共冲洗3次，总量共计900ml。向两个筒中加入硫乙醇酸盐流体培养基各100ml,并向其中一个硫乙醇酸盐流体培养基筒中加入小于lOOcfu金黄色葡萄球菌菌悬液lml作为阳性对照；另一筒加入改良马丁培养基100mlo细菌33°C、霉菌25°C培养14天,逐日观察并记录。阴性对

7、照：将PH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液过滤，冲洗方法同样品检验，培养，逐口观察并记录。3.5验证方法试验组：取供试品60支，每10支加入一个滤筒，滤筒内有约50ml的PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液，用无菌检测系统（HTY—1IIA型集菌仪）和一次性全封闭集菌培养器（KDGB330）全量过滤，过滤后用PH7.0无菌氯化钠-蛋白月东缓冲液冲洗滤膜，在最后一次的冲洗液中加入小于lOOcfu大肠埃