注射液无菌检查的方法学验证方案

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1、注射液无菌检查的方法学验证方案注射液无菌检查方法(屮国药典2010版)验证方案起草单位(Composedby):U期(Date)：审核人(ReviewedbyQC)：日期(Date)：批准人(Approvedby)：验证方案编号:2010・MEF・041・()5・()()4质检部(QCDepartment)起草人(Composer):U期(Date)：审核人(ReviewedbyQA)：日期(Date)：目录1.验证目的2.验证人员3.验证依据及参考文件4.仪器与设备5.验证过程5.1培养基及稀暫液5.2

2、菌液的培养与制备5.3方法验证试验6.验证总结1.验证目的:本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的町靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。2.验证人员：验证小组组长：刘长宏验证小组副组长：宋芳良验证小组成员：曲晓燕、常西胜3.验证依据及参考文件：验证依据：中华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版屮国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编(屮国药品检验所)4.

3、仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空火菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台1.验证过程：5.1培养基及稀禅液5.1.1培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录XIH无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液屮，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。结论：5.1.2.2培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分別接种小于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽施杆

4、菌、生他梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。取每支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分別接种小于lOOcfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。空白対照管应无菌牛长，若加菌的培养基管均生长良好，则可判该培养基的灵敏度检查符合规定。较差记为“差”。记为“差雹结论：5.2菌液的培养与制备5.2.1菌种5.2.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌一、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30〜35°C培养18〜24小时。用0.9%无

5、菌NaCl溶液制成每1ml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。収肉汤培养物lml+9ml0.9%无菌NaCl溶液，十倍稀释至10—5〜10—7稀释级可得约为50〜l()0cfu/ml的菌悬液。用营养琼脂培养基做活菌计数备用。接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基屮，3()〜35°C培养18〜24小时。用0.9%无菌NaCl溶液稀释至10—5〜10—7稀释级制成每lml含菌数小于1OOcfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23~28°C培养24-48小吋。用0.9%无菌NaCl溶

6、液制成每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。取改良马丁培养物lml+9ml0.9%无菌NaCl溶液，十倍稀释至10—5~10—7稀释级町得约为50~100cfu/ml的菌悬液。川改良马丁琼脂培养基做活菌计数备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面培养基中，23〜28°C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌NaCl溶液,将抱子洗脱。然后，吸出砲子悬液至无菌试管中，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌NaCl溶液制成每lml含他子数小

7、于lOOcfu的抱子悬液。取培养物lml+9ml().9%无菌NaCl溶液(含().05%(ml/ml)聚山梨酯80)

8、-倍稀釋至10-4稀释级可得约为5()〜l()()cfu/ml的抱了悬液。用改良马丁琼脂培养基做活菌计数备用。菌液制备后在常温下放置，并在2小时内使用。若保存在2-8°C,可在24小时便用。结论:5.3方法验证试验按屮国药典2010版二部规定，根据下表屮预定检验方案，将规定量的注射液供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最麻一次的冲洗液屮分别加入小于lOOcfu的试验菌之一，过滤。収出滤膜接种

9、至和应培养基中（金黄色匍萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孑包杆菌、牛砲梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基中；白色念珠菌、黑曲得接种于改良马丁培养基中）。另取一装有同体积培养基的容器，加入等址的相应试验菌，作为对照。按规定温度培养3〜5天，观察各试验管生长情况。各试验菌同法操作。与对照管（只加阳性菌）相比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好,则该供试品的该检验量在该检验条件卜•无抑菌作用或其抑菌作用对以忽略不计，对以照此检查法进行该