美罗培南无菌检查方法学验证

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1、美罗培南无菌检查方法学验证　　[摘要]目的建立美罗培南的无菌检查标准方法。方法根据中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法中的要求，采用薄膜过滤法进行方法学验证。结果每筒冲洗量600ml（分6次），人工振荡，可以消除样品对6株实验菌的抗菌活性。结论美罗培南采用薄膜过滤法，总冲洗量为1800ml，采取人工振荡，可以用大肠埃希菌作为阳性对照菌进行无菌检测。[关键词]美罗培南；无菌检查；方法学验证；薄膜过滤[中图分类号]R978.1+1[文献标识码]A[文章编号]1674-4721（2013）12（a）-0068-03美罗培南属于碳青霉烯类抗生素，通

2、过抑制细菌细胞壁的合成而产生抗菌作用[1]，在临床中应用广泛[2]，其具有对多种β-内酰胺酶稳定及抗菌谱广的特点[3-4]。在建立药品的无菌检查法时，应进行方法学验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查[5]。本文按照《中国药典》2010版的有关要求，通过接种代表性的阳性菌株[6]，采用薄膜过滤法，进行人工振荡及改变冲洗次数，对3个批次的美罗培南进行反复实验，以期找到消除美罗培南抗菌活性的方法和实验条件，建立相应的无菌检查法，现报道如下。51资料与方法1.1仪器HTY-K型振荡仪、高得泰林Htysteritest601型集菌仪、KDGB

3、330全封闭式集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司）。1.2样品美罗培南（批号：05001、05002、05003）为石药集团中诺药业生产。1.3试剂硫乙醇酸盐流体培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基。1.4菌种中国药品鉴定所提供的金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌（Escherichiacoli）[CMCC（B）44102]、枯草芽胞杆菌（Bacillussubtilis）[CMCC（

4、B）63501]、生孢梭菌（Clostridiumsporogenes）[CMCC（B）64941]、白色念珠菌（Candidaalbicans）[CMCC（F）98001]、黑曲霉（Aspergillusniger）[CMCC（F）98003]。1.5方法按中国药典2010版附录Ⅺ5H无菌检查法，采用薄膜过滤法[7-8]。1.5.1菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24h；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新

5、鲜培养物至改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48h；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数　　2结果2.1验证用微生物的计数结果在实验中可采用金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的稀释级别分别为10-6、10-7、10-5、10-5、10-5、10-5时，可满足药典要求，具体计数结果见表1。2.2阴性对照组微生物培养的结果阴性对照组的真菌和细菌培养均呈阴性，具体见表2。表2阴性对照组微生物培养的结果“-”表示无菌生长2.3阳性对照组微生物培养的结果阳性对照组的真菌和细菌培养均呈阳性，大肠埃希菌在同

6、样的冲洗条件下生长最慢，经过每膜6次冲洗，所有微生物菌在72h时成长良好，满足药典要求（表3）。3讨论5本研究显示，阴性对照组的真菌和细菌培养均呈阴性，提示本实验有效；阳性对照组微生物培养均呈阳性，提示采用的操作方法不影响抗生素样品中微生物的检出，符合药典规定；在代表性的4种细菌中，大肠埃希菌在同样冲洗条件下生长最慢，提示大肠埃希菌对美罗培南最敏感；经过每膜6次的冲洗，所有微生物均可在72h时成长良好，满足药典要求，但是冲洗5次则达不到此要求。2010版《中华人民共和国药典》规定[5]，应根据供试品的特性选择阳性对照菌。本研究验证实验显示，验

7、证用的美罗培南当冲洗量为每膜600ml时，可消除其抑菌性，且大肠埃希菌对其更为敏感。综上所述，美罗培南采用薄膜过滤法，总冲洗量为1800ml，采取人工振荡，可以用大肠埃希菌作为阳性对照菌进行无菌检测。[参考文献][1]孙心君，李永华，刘星，等.常用抗生素药物治疗学[M].天津：天津科学技术出版社，2009：100.[2]张伶俐，吉冬梅，金卉怡.碳青霉烯类抗生素的药理学特点及临床应用[J].中国临床研究，2010，23（4）：335-336.[3]袁桂清，唐迎曙.新一代碳青霉烯类抗生素美罗培南[J].中华医学杂志，2003，83（1）：65.5

8、[4]杨新云，吴玉新，洪诤，等.美罗培南等18种β-内酰胺类抗生素对产酶株的抗菌作用[J].现代临床医学生物工程学杂志，2003，9（6）：491-493，498.