【精品】细菌鉴定学习

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1、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应•你怎样运传统的细菌革兰氏染色法操作繁琐，初学者不易掌握，寻找一种简便方法。方法:玻璃片上将细菌与碱液混合，用接种环或接种针往上挑，观察有无丝状物出现，我们把它叫作“细菌拉丝实验”。结果：用本法鉴别细菌革兰氏染色性质，-菌有丝状物出现，即拉丝实验阳性，G八+菌无丝状物，拉丝实验阴性经过对照使用，本法具有快速，准确，简便，结果易判断，成本低廉等优点，值得推广应用。曲于细菌细胞壁的结构不同，革一兰氏染色法可使有的细菌染上初染的的紫色，为革兰氏阳性细菌，有的细菌染上复染的的

2、红色，为革兰氏阴性细菌。大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在。枯草杆菌是革兰氏阳性菌，染色后为紫色，细菌形态为杆状，比大肠杆菌大，可排成链状的,有的菌体里有椭圆芽他（无色）或在视野屮有散在的芽他。实验十肠杆菌科肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一人群寄居于人和动物肠道屮、生物学性状相似的革兰阴性杆菌。多数为肠道的止常菌群，但在机体免疫力低下或寄居部位发生改变时可引起感染。根据其牛化反应、血清学试验、DNA同源性等可将肠杆菌科分为120多个菌种，其中与医学密切相关的有埃希菌属、志贺菌属、沙

3、门菌属等。%1.大肠埃希菌大肠埃希菌（E.coli）俗称大肠杆菌，是寄居丁人和动物肠道的止常菌群。当机体抵抗力卜降、该菌侵入肠外组织或器官，对引起急性炎症或继发感染；有些血清型可引起腹泻。从水和食品屮检出较多人肠杆菌时，可判断它们已被粪便污染。因此，人肠杆菌常被作为饮水、牛乳及食品的卫生学检测指标。（一）形态与培养特性【材料与方法】1.大肠杆菌革兰染色标本片。2.大肠杆菌普通琼脂平板、SS平板、中国蓝平板、伊红美蓝（EMB）平板培养物。［结果］1.大肠杆菌为革兰阴性、中等大小杆菌，两端饨圆或稍弯曲，呈分散排列。培养基菌落特征普通琼脂平

4、板圆形，中等大小，灰口，整齐，光滑菌落SS平板呈红色中国蓝平板呈蓝色伊红美蓝平板呈紫黑色，有金属光泽表10-1大肠杆菌在普通琼脂平板及选择鉴别培养基上的菌落特征2.菌落特征（表10-1）。（二【材料与方法】1.取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管,37°C培养24h,观察结果。2.取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于双糖铁培养基，37°C培养24h,观察结果。3.靛基质产生、甲基红、VP、枸椽酸盐利用试验（IMViC试验），见实验四。【结果】大肠杆菌牛化反应结果（表10-2）o表10-2大肠杆菌及产气杆菌5

5、种糖发酵、双糖铁、IMViC试验结果[•层下层葡乳麦甘，战II引味甲基红VP枸椽酸盐乳H?S葡动力©++-©+二、沙门菌属沙门菌M（Salmonella）为一群生化反应、抗原结构相似的革兰阴性杆菌，血清型别繁多,对人致病的有伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌、肠炎沙门菌，鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌等，可引起人致伤寒、副伤寒、胃肠炎和败血症等疾病。（一）形态与培养特性【材料与方法】1.伤寒沙门菌革兰染色标本片、鞭毛染色标本片。2.伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌在普通琼脂平板，中国蓝平板，SS平板，伊红美蓝平板

6、18〜24h培养物。【结果】1.伤寒沙门菌为革兰阴性杆菌，分散排列，鞭毛呈粗大、大波浪形。2.菌落特征：伤寒、副伤寒沙门菌菌落特征一致（表10-3）。表10-3伤寒、副伤寒沙门菌在普通琼脂平板、选择鉴别培养基上的菌落特征培养基菌落特征普通琼脂平板恻形，中等人小，灰白，半透明，边缘整齐光滑SS平板较小，淡黄色，半透明中国蓝平板较小，淡红色半透明伊红美蓝平板较小，无色，半透明（二）生化反应【材料与方法】1.取伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管，37°C培养24h,观察结果。2.取伤寒

7、沙门菌，卬型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于双糖铁培养基，37£培养24h,观察结果。3.U引味试验、尿素分解试验见实验以。【结果】生化反应结果（表10-4）。表10-4伤寒、副伤寒杆菌主要牛化反应结果细菌葡乳麦廿蔗动力h2s眄陈尿素伤寒杆菌+++_++甲型副伤寒杆菌©_©©_+d--肖氏沙门菌©_©©_++—一（三）肥达（Widal）试验【原理】用己知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与待检血清作定量凝集试验，以测定待检血清中有无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考，-•般间隔5〜

8、7d重复采血检查，如抗体效价随病程进展而上升，即有诊断价值。【材料】1.伤寒沙门菌O、H抗原菌液，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌H抗原菌液，牛理盐水，待检血清。1.试管、1ml吸管、试管架、37°C水浴箱等。【方法】1.取