[精品]实验七细菌鉴定中常用的生化实验

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1、实验七细菌鉴定中常用的生理生化实验一、实验目的学习并掌握细菌分类鉴定中常用的生理生化反应的原理及操作步骤，比较不同细菌的生理生化反应结果。二、实验原理（一）糖发酵实验最常用的生化实验。细菌可发酵糖类（葡萄糖、蔗糖、乳糖等）产生各种有机酸（乳酸、醋酸、丙酸等）及各种气体（CH“、也、CO2等）。不同细菌分解糖的能力不同，有些细菌分解糖类产酸并产气，有的产酸但不产气。因此可以根据细菌分解利用糖能力的差异作为鉴定菌种的依据。酸的产生可以利用指示剂来指示。在配置培养基时可预先加入漂甲酚紫（酸械指示剂，pH5.2（黄色）-6.8（紫色）），当细菌发酵糖产酸时，会使培养液由紫色变为

2、黄色。气体的产生可以从培养液中倒置的糖发酵管的上端有无气泡来判断。（二）呼I味实验有些细菌含有色氨酸酶，能够分解培养基内蛋白月东中的色氨酸，产生呻朵。呼I味本身无颜色，不能直接看见。所以加入对二甲基氨基苯甲醛试剂，使之与口引味作用，形成红色的玫瑰口引味。（三）淀粉水解实验有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖等，淀粉水解后遇碘不再变蓝。依此可以判断某细菌有无分解淀粉的能力。三、实验材料1、菌种：金黄色葡萄球菌、产气杆菌2、培养基：1）蛋白豚水培养基配方如下：蛋白月东10gNaCl5g葡萄糖10g1.6%,臭甲酚紫溶液2ml

3、蒸馅水1000mlpH7.4115°C/30min灭菌2）葡萄糖蛋白豚水培养基配方如下：蛋白月东5gK2HP042g葡萄糖5g蒸馅水1000mlpH7.0-7.212rC/30min灭菌3）淀粉培养基配方如下：蛋白月东10g牛肉膏5gNaCl5g可溶性淀粉2g琼脂18-20g蒸馅水1000mlpH7.0-7.212rC/30min灭菌3、仪器与用品恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电炉子、带刻度搪瓷杯、玻璃棒、试管、试管架、移液管、发酵管、三角瓶、广泛pH试纸、培养皿、眄

4、味试剂、乙瞇、卢哥氏碘液四、实验方法与步骤（一）糖发酵实验1、培养基的制备、分装与灭菌2组做一份500m

5、l分装三分之一到四分之一，同时将装有培养液的发酵管倒置于试管中，塞好棉塞，包扎。每组装5管，115°C/30min灭菌。2、接种与培养采用无菌操作技术将大肠杆菌和产气杆菌分别接种于试管中，置于37°C恒温培养箱中培养2d,另作一空白对照。3、观察结果与对照管比较，颜色不变，表明该菌不能利用葡萄糖，反应结果为阴性，若培养液变黄，表明该菌能分解葡萄糖产酸，为阳性。倒置发酵管中如有气泡，上浮，表明代谢产气。（二）□引味实验1、培养基的制备、分装与灭菌2、接种与培养于试管壁上注明菌种名称，置于37°C恒温培养箱中培养2d.3、观察结果取出试管，在培养液中加入乙瞇lml,充分振荡

6、，使口引味溶于乙瞇中，静置片刻，使乙瞇浮到培养液上层。然后再沿管壁缓慢加入呼I味试剂5滴，如有呼I味存在，则乙瞇层呈现玫瑰红色。注意：加入试剂后，不可再摇动,否则界面液体被混合，红色环不明显。记录实验结果。（三）淀粉水解实验1、培养基的制备、分装与灭菌将配置好的培养基分装到2个三角瓶中，121°C/30min灭菌2、接种与培养将溶化后的培养基无菌操作倒平板，待冷凝后，用接种环无菌操作，挑取少许大肠杆菌点接于平板一边，另一边用同样方法点、接产气杆菌。置于37°C恒温培养箱中培养2d。3、观察结果取出平板，扌丁开平皿盖，滴加碘液，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平皿。菌落周围如

7、果出现无色透明圈，则说明淀粉已经被水解，表示该菌具有分解淀粉的能力。可以用透明圈大小说明测试菌种水解淀粉能力的强弱。五、实验作业列表记录实验结果。