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1、1.2.1形态学特征按照东秀珠和蔡妙英编《常见细菌系统鉴定手册》（1999）,屮科院微生物所编著《一般细菌常用鉴定方法》（1978）的方法进行鉴定。芽抱杆菌属鉴定到种,参照了蔡妙英等译《芽抱杆菌屈》（1980）的方法。（1）革兰氏染色：挑选少许菌苔，涂布于干净玻片的蒸镭水屮，风干固定，结晶紫染色（结晶紫2g,草酸桜0.8g,95%乙醇20ml,加水至100ml）lmin,水洗后碘液（碘lg,碘化钾2g,水300ml）作用lmin,水洗，脱色，用番红O液染3min,水洗，风干，光学显微镜观察。（2）鞭毛染色：将16〜24h菌
2、龄的菌苔在载玻片上的水滴中轻蘸几下，将玻片倾斜，使菌液缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥。干燥后滴甲液（丹宁酸5g,FeCl31.5g,15%福尔马林2ml,l%NaOH1ml,蒸憾水100ml）染6〜lOmin,水洗，干燥后，用乙液（2%AgNO3溶液）加热复染30min,蒸馆水冲洗，干燥,镜检，菌体为深褐色，鞭毛为褐色。（3）运动性：半固体琼脂穿刺法，将菌种接在可使鉴定菌生长良好的培养基中，其中含0.3〜0.6%的琼脂。适温培养，运动性可用透射光目测，如生长菌只生长在穿刺线上，边缘十分清晰，则表明鉴定菌无运动性；如生
3、长菌由穿刺线向四周呈云雾状扩散，其边缘呈云雾状，则表示鉴定菌有运动性。（4）芽抱染色：孔雀绿染色法。按革兰氏染色涂片后，用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6%）染20min,水冲洗后在用0.5%番红O复染20〜30s,水洗，吸干,镜检。芽抱呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色。（5）抗酸染色：常规涂片，石碳酸复红（10%碱性复红乙醇饱和液10ml,5%石碳酸水溶液100ml）加热染色5min,倾去染液用酸性乙醇脱色，吕氏美蓝（2%亚甲基蓝乙醇饱和液30ml,0.01%KOH100mlo）复染2min,水洗，吸干，镜检。（6）荚膜染色：在
4、载片一端滴一滴无菌水，取少许菌苔在水滴中制成悬液。取一滴墨汁与菌悬液混合，并用另一载片之一端将此水滴在载片上刮成薄膜风干。用纯甲醇固定1min,加0.5%番红O液数滴滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30s,然后倾去染液，立即吸干，镜检。1.2.2培养及生理特性（1）菌落形态：用划线法将菌种接在平板培养基上，适温培养1〜2d,岀现单菌落开始观察，包括形状和大小，边缘，表而，隆起形状，透明度，菌落和培养基的颜色等。（2）生长温度和耐热性：将菌种转接到几支试管中，分别在不同温度下培养,每处理2管，目测生长情况。(3)芽鞄厌氧性测定
5、：将菌种用外径为1.5mm的接种环穿刺接种在厌氧培养基(酪素水解物20g,NaCl5g,筑基醋酸钠2g,甲基次硫酸钠lg,琼脂15g,蒸憎水1000ml),30°C培养，3d和7d分别观察，表面生长者为好氧菌，如沿穿刺线或下部生长者为兼性厌氧菌或厌氧菌。(4)碳源利用：将菌种接种在各种碳源斜面培养基(MgSCU・7H2O0.2g,(NH4)H2PO4・H2O0.5g,K2HPO40.5g,CaCl2*2H2OO.lg,(NH4)2SO42.0g,蒸馆水1000ml,碳源分别为蔗糖、乳糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露醇等，终浓度
6、为0.1%〜0.2%)上，适温培养Id,以菌悬液接种，能生长者即培养基变浑浊为阳性，否则为阴性。(5)氮源利用：将菌种接种在各种氮源斜而培养基(MgSCU・7H2O0.2g,(NH4)H2PO41.36g,Na2HPO42.13g,CaCl25.00ml,FeSO4*7H2O0.50ml,葡萄糖10.0g,蒸憎水1000ml),氮源分别为氨态氮如磷酸氢二钱或硝态氮如硝酸钾、乳糖、果糖、木糖、半乳糖等，终浓度为0.2%〜0.5%)上，适温培养Id,以菌悬液接种，能生长者即培养基变浑浊为阳性，否则为阴性。(6)柠檬酸盐利用：将
7、菌种接种在柠檬酸盐斜而培养基(NaCl5g,MgSO4*7H2O0.2g,(NH4)H2PO41g,K2HPO4UH2Olg,柠檬酸钠2g,0.04%酚红10ml,琼脂12g,蒸Y留水1000ml)上，适温培养3〜7d,培养基变为桃红色者为阳性，否则为阴性。(7)耐盐性和需盐性：将菌种分别接种在含3%,5%,7%,10%含NaCl的肉汁腺液体培养基屮，适温培养3d、7d,口测生长情况。(8)丙酸盐利用：将菌种接种在丙酸盐斜而培养基上(丙酸钠2g,NaCl5g,MgSO4*7H2O0.2g,(NH4)HPO41g,K2HPO
8、4*3H2Olg,0.04%酚红10ml,琼脂12g,蒸懈水1000ml)上，适温培养3〜7d,培养基变为桃红色者为阳性，否则为阴性。1.2.3生化特性测定(1)氧化酶：将1%的四甲基对苯二胺水溶液滴于干净培养皿的滤纸上，滤纸湿润即可，用牙签取18〜24h的菌苔涂抹于湿润滤纸上，在10s内涂抹的菌苔呈蓝
