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1、一淀粉水解试验（一）实验原理细菌对大分子的淀粉、蛋口质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋口酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其屮的屮性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。（二）实验方法将淀粉培养基溶化后，冷至45C左右，以无菌操作制成平板。取18-24h的纯培养物点于平板JL,每皿可点种3・5个菌株，适温培养2-4d,形成菌落后
2、，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板成蓝色。如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉己经被水解，实验为阳性，否则为阴性。透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。（三）实验试剂的配制肉汤蛋白腺琼脂成分：蛋白腺10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸饰水1000mL,pH7.2o淀粉培养基制法：在肉汤蛋白腺琼脂小添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6,分装三角瓶，20min灭菌备用。卢戈氏（Lugol）碘液：碘片1g,碘化钾2g,蒸懈水300ml,先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液屮，混匀，定容。二糖发酵试验（一）实验原理单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖
3、等分别加入蛋白月东水培养基内，使其最终浓度为0.75-1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37°C培养1&24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。（二）实验材料1.菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18・24小时琼脂斜而培养物。2•培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。（三）实验方法1.将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。2.置37°C孵箱培养18-24小时。3.观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基屮pH下降到7.0以下，在酚红指示剂
4、的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同时产生气体，则培养基屮小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以'㊉”表示,不分解，则指示剂不变色，用叮表示。（四）实验结果伤寒杆菌大肠杆菌葡萄糖+㊉乳糖・㊉（五）实验试剂的配制仁单糖发酵管的制备：成分：蛋白腺水培养基100ml,0.2%酚红1ml,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75/g制法：（1）将上述成分溶化，混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管屮，每管约2ml,加塞。（2）小倒管排气，灭菌（8/0磅，20-30分钟），贮存备用。用途：供单糖发酵试验用。2.0.2%酚红配制法酚红（phenol「ed）0.2g,O.lmol/LNaOH
5、8ml,蒸饰水92ml将酚红入研钵徐徐加入O.lmol/LNaOH研磨，再补足蒸饰水即成。若需长时间保存，可高压灭菌后贮存备用。三甲基红（M.R）试验（一）实验原理某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生内酮酸，继血分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。（二）实验材料1.菌种：大肠杆菌，产气杆菌18-24h琼脂斜而培养物。2.培养基：葡萄糖蛋白腺水培养基。3.试剂：甲基红试剂。（三）实验方法1.分别将大肠杆菌，产
6、气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白腺水培养基屮。2.置37°C培养天取出，分别滴加甲基红试剂2・3滴，混匀，观察结果。（四）实验结果大肠杆菌：+,产气杆菌：・。（五）实验试剂的配制1.甲基红试剂的配制甲基红0.04g,95%酒精60ml,蒸饰水40ml□先使甲基红溶解于酒精屮，再加入蒸懈水，混合，摇匀即成。2•葡萄糖蛋白腺水培养物成分：蛋白腺5g葡萄糖5g制法：（1）将上述成分溶解于蒸馆水中。（2）调节pH至7.6,用滤纸过滤除渣。（3）分装屮试管，每管约3-4ml,灭菌后备用。用途：供甲基红及V・P试验用。四产眄I味（indole）试验（一）实验原理某些细菌如大肠杆菌，变形杆菌等具有色氨酸酶
7、，能分解蛋口月东水培养基屮的色氨酸，产生靛基质（无色眄際），再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应,形成红色化合物一玫瑰删味，即为阳性反应。（二）实验材料1.菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌1&24小时琼脂斜而培养物。2.培养基：蛋白腺水培养基。3•试剂，欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛）（三）实验方法1.分别将大肠杆菌，伤寒杆菌接种于两支蛋白腺水培养基屮。2.置37°C培养2・3天后，每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面
