[精品]细菌鉴定的生理生化反应

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1、细菌的生理生化反应实验组别：周四晚第四组指导老师：李海花【摘要】各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不i样,因而代谢产物或多或少地各冇区别，可供鉴别细菌Z用.【关键词】细菌鉴定，生理生化反应，IMVIC,糖发酵，硫化氢，硝酸盐一、实验目的:1.学习各种生理生化反应实验的原理2.学习巩固各种主理生化反应实验的接种方式并熟练掌握各种接种方法3.观察细菌常用生理生化反应实验结果二、实验原理:由于各种微生物具冇不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产牛的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定屮，生理

2、生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差开。有些细菌能分解某种糖产牛有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；产酸后澳甲酚紫指示剂可曲紫色pH（6.8）变为黄色（pH5.2）,产气的细菌可使半固体培养基中存冇气泡.1•糖发?试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的2.IMVIC实验：主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。1）卩引味试验：在蛋白淼培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋口豚中的色氨酸分解为内酮酸和U引味，眄I卩朵与对二甲基苯甲醛反

3、应牛成玫瑰色的玫瑰眄I2）V.P.反应和甲基红试验：V.P.反应：某些细菌在糖代谢过程屮，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱竣通过缩合和脱竣后转变成乙酰甲基甲醇（亦称三轻基丁酮），然后被还原为2,3-T二醇，乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白月东中的精氨酸的弧基起作用生成红色化合物。在试管中加入a■蔡酚时，可促进反应进行。甲基红反应：某些细菌在糖代谢过程屮，将培养基屮的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。有机酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色进行检测。甲基红变色范围为pH4.2（红）〜6.3（黄）。细菌分解葡萄糖产酸，将培养液由原

4、來的橘黄色变为红色。3）柠檬酸盐实验:肠朴菌科各屈细菌利用柠檬酸的能力不同，冇的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。某些菌分解柠檬酸形成C02、由于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使培养基碱性增加，根据培养基屮的指示剂变色情况来判断试验结果。指示剂可用1%的混麝香草酚蓝酒精溶液，变色范围为pH6.3（黄）〜7.6（蓝）•2.硫化氢产生实验某些细菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇重金属盐如铅盐、铁盐吋则生成黑色硫化铅或硫化铁沉淀，从而可确定硫化氮的产生。在培养基中加入柠檬酸铁钱或醋酸铅，培养后观察是否有黑色沉淀产生。培养基中加入硫代硫酸钠是为了保持低的氧化还原电位，防止产生

5、的硫化氢被空气屮的氧氧化，采用同体穿刺接种也是为了更好的保持低的氧化还原电位.3.硝酸盐还原实验某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮气等。如果细菌能把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，当培养基中加入格利斯亚硝酸试剂时，则培养液呈粉红色或红色，为正反应。如果在培养液中加入格利斯亚硝酸试剂后溶液不出现红色，则有两种可能性:1）细菌不能还原硝酸盐，故培养后的培养液屮仍有硝酸盐存在，此为负反应。2）硝酸盐被细菌还原为亚硝酸盐后，亚硝酸盐继续被还原成氨和氮气，故培养液中也没有硝酸盐存在，此反应为正反应。培养液中硝酸盐存在与否可用下列方法检查：在培养液中加入二笨胺试剂,如溶液呈蓝

6、色，则说明原来的硝酸盐未被还原，此系负反应。但如果在培养液屮加入二苯胺试剂，溶液不呈现蓝色，则说明培养液中己不存在硝酸盐，故为正反应。三、实验材料1.培养基：生理生化反应用的各种平板，斜面，液体，半固体培养基.2.器材：试管架，酒精灯，火柴，接种环（针），牛皮纸，记号笔等.3.试剂：卬基红试剂、VP试剂、KOH试剂、卿味试剂、格里斯试剂A、B点滴板、二苯胺试剂4.菌种：大肠杆菌，产气杆菌，变形杆菌!1!实验步骤:1、制备培养基（本组制备柠椽酸盐培养基）1)培养基的配方：NH4H2PO40.2gK2HPO40.2g柠檬酸钠0.4gMgSC)440mgNaCl0」g1%麝香草酚蓝酒精

7、液2ml琼脂4.0g口来水200mLpH6.82）操作流程：称量…溶解…调pH值…加溟麝香草酚蓝指示剂…分装大试管30支（每支7ml）…盖帽…包扎…待灭菌（⑵°C,20分钟）…灭菌后摆斜面*培养基的pH值是关键，调节pH时要耐心小心2、接种培养*按下表接种并做好标记实验名称培养基接种方式菌种糖发酵糖发酵培养基液体接种大肠杆菌，变形杆菌柠檬酸盐利用柠檬酸盐培养基斜面划线大肠杆菌，产气杆菌硫化氢产生实验醋酸铅培养基穿刺接种大肠杆菌，变形杆菌口弭朵产生实验蛋白月东水培养基液体接种大肠杆