细菌鉴定学习.doc

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1、现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌,请你鉴定其革兰氏染色反应.你怎样运传统的细菌革兰氏染色法操作繁琐，初学者不易掌握，寻找一种简便方法。方法：玻璃片上将细菌与碱液混合，用接种环或接种针往上挑，观察有无丝状物出现，我们把它叫作“细菌拉丝实验”。结果：用本法鉴别细菌革兰氏染色性质，G＾－菌有丝状物出现，即拉丝实验阳性，G＾＋菌无丝状物，拉丝实验阴性经过对照使用，本法具有快速，准确，简便，结果易判断，成本低廉等优点，值得推广应用。由于细菌细胞壁的结构不同，革兰氏染色法可使有的细菌染上初染的的紫色，为革兰氏阳性细菌，有的细

2、菌染上复染的的红色，为革兰氏阴性细菌。大肠杆菌是革兰氏阴性菌，染色后为红色，细菌形态为短小的杆状，单个存在。枯草杆菌是革兰氏阳性菌，染色后为紫色，细菌形态为杆状，比大肠杆菌大，可排成链状的，有的菌体里有椭圆芽孢（无色）或在视野中有散在的芽孢。实验十肠杆菌科肠杆菌科(Enterobacteriaceae)是一大群寄居于人和动物肠道中、生物学性状相似的革兰阴性杆菌。多数为肠道的正常菌群，但在机体免疫力低下或寄居部位发生改变时可引起感染。根据其生化反应、血清学试验、DNA同源性等可将肠杆菌科分为120多个菌种，其中与医学密切相关

3、的有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属等。一、大肠埃希菌大肠埃希菌(E.coli)俗称大肠杆菌，是寄居于人和动物肠道的正常菌群。当机体抵抗力下降、该菌侵入肠外组织或器官，可引起急性炎症或继发感染；有些血清型可引起腹泻。从水和食品中检出较多大肠杆菌时，可判断它们已被粪便污染。因此，大肠杆菌常被作为饮水、牛乳及食品的卫生学检测指标。（一）形态与培养特性【材料与方法】1．大肠杆菌革兰染色标本片。2．大肠杆菌普通琼脂平板、SS平板、中国蓝平板、伊红美蓝(EMB)平板培养物。【结果】1．大肠杆菌为革兰阴性、中等大小杆菌，两端钝圆或稍弯曲，

4、呈分散排列。2．菌落特征(表10-1)。表10-1大肠杆菌在普通琼脂平板及选择鉴别培养基上的菌落特征培养基菌落特征普通琼脂平板圆形，中等大小，灰白，整齐，光滑菌落SS平板呈红色中国蓝平板呈蓝色伊红美蓝平板呈紫黑色，有金属光泽（二）生化反应【材料与方法】1．取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管，37℃培养24h，观察结果。2．取大肠杆菌、产气杆菌分别接种于双糖铁培养基，37℃培养24h，观察结果。3．靛基质产生、甲基红、VP、枸橼酸盐利用试验(IMViC试验)，见实验四。【结果】大肠杆菌生化

5、反应结果(表10-2)。表10-2大肠杆菌及产气杆菌5种糖发酵、双糖铁、IMViC试验结果上层下层葡乳麦甘蔗吲哚甲基红VP枸橼酸盐乳H2S葡动力大肠杆菌⊕⊕⊕⊕d+　-　⊕+++--产气杆菌⊕⊕⊕⊕++-⊕+--++二、沙门菌属沙门菌属(Salmonella)为一群生化反应、抗原结构相似的革兰阴性杆菌，血清型别繁多，对人致病的有伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌、肠炎沙门菌，鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌等，可引起人致伤寒、副伤寒、胃肠炎和败血症等疾病。（一）形态与培养特性【材料与方法】1．伤寒沙门菌革兰染色

6、标本片、鞭毛染色标本片。2．伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌在普通琼脂平板，中国蓝平板，SS平板，伊红美蓝平板18~24h培养物。【结果】1．伤寒沙门菌为革兰阴性杆菌，分散排列，鞭毛呈粗大、大波浪形。2．菌落特征：伤寒、副伤寒沙门菌菌落特征一致(表10-3)。表10-3伤寒、副伤寒沙门菌在普通琼脂平板、选择鉴别培养基上的菌落特征培养基菌落特征普通琼脂平板圆形，中等大小，灰白，半透明，边缘整齐光滑SS平板较小，淡黄色，半透明中国蓝平板较小，淡红色半透明伊红美蓝平板较小，无色，半透明（二）生化反应【材料与方法】1．取伤

7、寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖发酵管，37℃培养24h，观察结果。2．取伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌分别接种于双糖铁培养基，37℃培养24h，观察结果。3．吲哚试验、尿素分解试验见实验四。【结果】生化反应结果(表10-4)。表10-4伤寒、副伤寒杆菌主要生化反应结果细菌葡乳麦甘蔗动力H2S吲哚尿素伤寒杆菌+-++-++--甲型副伤寒杆菌⊕-⊕⊕-+d--肖氏沙门菌⊕-⊕⊕-++--（三）肥达(Widal)试验【原理】用已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门

8、菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与待检血清作定量凝集试验，以测定待检血清中有无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考，一般间隔5～7d重复采血检查，如抗体效价随病程进展而上升，即有诊断价值。【材料】1．伤寒沙门菌O、H抗原菌液，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌H抗原菌液，生理盐水，待检血清。2．