细菌的初步鉴定.doc

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1、细菌的初步鉴定-、启动条件:1、目地样：同一取样原因，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定。如表现性状不同的，需分别进行鉴定；不同取样原因，需分别取样进行鉴定。2、随机样：相同时段出现坏包，取表现性状相同的任意1—2包进行细菌初步鉴定;不同时段出现坏包，需分别进行鉴定。3、坏包产品的包装无明显破损。4、由微生物污染引起的坏包：酶类及化学反应用不同的查验方式。二、样品处理准备1、检测时发现产品感官及PH值冇明显变化时,需快速将酸包产品的内容物移入无菌容器内（移入时需用75%的酒精棉对操作员手及开包产品的移出口进行擦试灭菌），并需快速检测。如不能

2、检测，需冷藏保存2小时内进行检测。2、胀包：使用75%酒精棉对样詁外表面擦试消毒后放于超净台内待检。检测时，以无菌操作在无横纵封处剪一半圆或三角取样。三、检测（划线，接种培养）:低酸产品：检测细菌、芽抱、耐热芽抱，必要时检测霉菌、酵母菌。咼酸产品：检测细菌、宙菌、酵母菌。1、细菌：采用无菌手续取1H11样品接种于培养皿屮，使用普通营养琼脂于36±TC/48小时条件下培养;另采用无菌操作使用接种环于营养琼脂上作划线培养（37°C/48h）2、芽砲、耐热芽砲：以无菌操作取10ml样品于两个小试管中，分别在80°C和100°C的水浴中加热lOmino冷却后

3、使用营养琼脂培养基的无菌操作，分别作芽砲（36+l°C/72h）和耐热芽子包（55±l°C/72h）的接种与划线培养。80°ClOmin—杀灭全部未形成抱了的细菌细胞，抱了可存活。100°ClOmin-杀灭部分细菌孑包子，耐热孑包子可存活。3、霉菌、采用接种环以无菌手续于专用培养基上作划线培养,另采用1ml吸管以无菌操作，接种1ml样品于专用培养基屮培养。（条件25—28°C/5天）四、记录样品：名称、批号、取样原因、时间、样品感官、PH值、酸度、气体形成、包装密封性、凝块、分离等。五、初步粗略鉴定：（一一对应）1、菌落形态记录：此吋计数不重要，观察

4、单一菌丛还是混合菌丛。a>大小：〈lnmi为露滴状菌落,l-2mm为小菌落，2-4mni为中等小菌落,4-6mni大菌落,>6mm为巨大菌落。b・形状：圆形、不规则状，假根状等。c.隆起度：扩展，台状、低凸状、乳头状等。d.菌落边缘：边缘整齐、锯齿状、毛刷状等。e.表面性状：光滑、褶皱、同心环状等。f•表面光泽：金属光泽、腊状等。g・颜色透明度：透明、半透明、不透明等。H、气味、湿润度、颜色等其他。2、鉴别：（1）、初染：选取不同形态的单一菌落。属阴性染色，微生物不着色，在黑背景处观察清噺、闪亮点鉴别：球菌、杆菌。G—菌易扭曲变形，造成鉴别困难方法：

5、滴一滴苯胺黑（2%水溶液）或结晶紫染液于载玻片上，用接种环挑取少量菌于涂液的载玻片处，完全涂匀。待自然干燥后，滴香柏油，使用显微镜的油镜观察。（2）、G染色a、球菌：对于球菌，不一致需要G染色，因为CT球菌不会成为液体食品中的腐败菌，可直接进行出02酶实验。鉴别出。2酶阳性、阴性球菌。B、杆菌：需进行G染色，鉴别CT或G+,有无芽他形成。1、G染色固定的口的：①防止菌落被水冲掉②杀死细菌，固定菌落结构。②改变细菌对染液的通透性。2、媒染：增强染液与菌体间的作用力。3、脱色：测知燃料与被染物Z间结合的牢固程度，具有鉴别细菌的作用。G+C壁主要由肽聚糖组

6、成；着色能力强。GC壁主要由磷脂、脂多糖组成；着色能力弱。脱色时间控制：时间长：G+-*G_时间短：G"-G+4、复染：使已脱色的菌体重新染上与而染液颜色成明显对比的颜色。（3）、H2O2酶试验:是一个裂解H2O2,产生O2的过程。鉴别出。2酶试验阴性或阳性的CT杆菌。方法：滴-滴10%的H2O2溶液于载玻片上，使用接种环挑取少量与菌落形态、初染、G染色均对应的菌落，于涂有出。2的载玻片，完全涂开观察。结果：有气体生成一HO?酶阳性；无气体生成一出02酶阴性。4、氧化酶试验：鉴别氧化酶试验阳性、阴性的G一杆菌。方法：取一试纸条，使用接种环挑取少量相对

7、应的菌落涂于试纸条有药品的一端，观察。结果：不变色一氧化酶阴性变色一氧化酶阳性坏包分析：坏包率二加工残留+再污染加工残留的微生物生长繁殖相对缓慢，1・2小时/代再污染的微生物生长繁殖相对快些，1・10分钟/代1、混合感染、菌丛：空气、水、包装不严密表明产品的再污染（产品在通过杀菌机中的保温管以后，通常是在温度低于100°C的区域）密封圈损坏杀菌机的冷却部分泄漏（再生和终末冷却器）、不严密的包装等主要原因。2、纯污染：相对较少主要是清洗和预灭菌不充分。A、由细菌抱子引起的污染常见原因：杀菌不充分、产品屮有特殊物质、在80°C以上的温度条件下再污染、包装

8、材料的消毒、在无菌灌装机中的无菌空气系统。B、由耐热细菌砲了引起的污染常见原因：产品杀菌（超高温处理）、工厂