孵育法处理不液化精液的初步研究

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1、孵育法处理不液化精液的初步研究山东医药2000年第21期第40卷论著作者：王新生王沛涛刘海宇单位：青岛大学医学院附属医院山东青岛266003关键词：精液不液化体外孵育摘要为建立一种体外处理不液化精液的有效方法，将20例不育症患者不液化精液每份分成对照组、离心洗涤组（下称离心组）、孵育组，分别检测三组样本精子的多项功能指标。结果孵育组、离心组精子功能指标优于对照组（P<0.01或0.001）,孵育组精子回收率和某些指标优于离心组（P<0.05或0.01）o认为孵育法处理不液化精液的简便方法，效果可靠，值得推广应用。中图分类号：R697文献标识码：AAbstractToestablis

2、haneffectivemethodofinvitrotreatingnonliquefyingsemen.Thenonliquefyingsemenfrom20patientswithinfertilityweredividedintocontrastgroup,centrifugalgroupandincubationgroup.Thefunctionalpararmetersofthespermofthreegroupswereexamined・Resultsshowedthattheparametersoftheothertwogroupswerebetterthantha

3、tofthecontrastgroup(PV0.01or0.00l)andtheretrievalrateandseveralfunctionalparametersofspermintheincubationgroupwerebetterthancentrifugalgroupobviously(P<0.05or0・01).Thissuggesttheincubationmethodiseffectivemethedofthetreatingofnoniquefyingsemen,andisdeservedtobewidelyusedclinically.KeywordsNonl

4、iquefyingInvitroIncubation临床治疗精液不液化所致男性不育症多先应用各种体外处理技术对不液化精液进行处理，再行人工授精，此法常用且有效。处理精液的方法主要有精液吹打法、玻璃纤维滤过法、体外加酶法、离心洗涤法等，其中离心洗涤法较多采用〔1)。本研究根据不液化精液的物理特性，采用孵育法处理不液化精液，对处理后精子的多项功能指标进行了对照观察分析，现报告如下。1材料与方法1.1材料取20例不育夫妇的不液化精液(禁房事3〜7天，37°C恒温水浴30分钟不液化)。精子体外处理介质为HAM'S/F10溶液(Hyclone)+10%小牛血清。宫颈粘液(CM)：健康女性月经

5、中期宫颈粘液，评分10分以上。1.2方法1.21精液处理方法将每份不液化精液分为3份进行分组处理。①对照组（20例）：精液置洁净的容器中，置于37°C的水浴箱内，90分钟后进行实验观察。②离心组（20例：按1：9比例将精液与处理介质混合，轻轻搅拌后离心（1500r/min）15分钟弃上清；在沉淀物上加5ml处理介质，37°C恒温水浴箱内孵育60分钟,收集上层介质于离心管内，离心（1500r/min）15分钟弃上清，再加5ml处理介质，混匀后孵育10分钟，测定相关指标（2〕。③孵育组（20）例：将不液化精液分别加入数个（据精液量定）盛有2ml处理介质的小烧杯内，精液量不超过0.5ml

6、,轻轻搅拌一下，37°C水浴箱内孵育60分钟取出，分别将混合液中不液化的精液轻轻吸弃，收集剩余溶液于离心管内，离心（2000r/min）15分钟弃上清，沉淀部分加入0.5ml处理介质，轻轻摇匀，孵育10分钟。1.2.2精液指标测定①精子计数：精子稀释液稀释后用细胞计数板计数。②精了活率：染色法。③精了活动力：计数3、4级活动力精了的百分率。④精了尾部肿胀率：低渗溶液中精了尾部发生肿胀的百分率。⑤精子CM穿造试验：37°C恒温水浴箱内，精子30分钟穿过CM的距离（3）。1.2.3统计学方法计算各组精子观察指标，求出平均值和标准差。对不同组间同一观察指标进行统计学分析（精子回收率为精子

7、计数与对照组精子计数比较所得）。2结果本研究所用精液样本容积2~4.5ml,精子计数4000万〜5000万，活动率47%〜72%。结果显示，与对照组比较，孵育组和离心组精子活动率和精子活动力均有显著性提高，精子CM穿透力和尾部肿胀率也高于对照组（分别为P<0.01或0.001）o孵育组与离心组的精子回收率分别为45%和30%（P<0.001）,孵育组精子活率、活动力、精子CM穿透力和尾部肿胀率高于离心组（P<0.05或0.01）,见表1。表1三组精子检测结果比较（土s