根霉与米曲霉原生质体一次基因组改组后代酶活力和形态特性变化规律研究【毕业论文】

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1、本科毕业设计（20__届）生物工程根霉与米曲霉原生质体一次基因组改组后代酶活力和形态特性变化规律研究摘要本实验是对根霉与米曲霉原生质体一次基因改组的后代进行进一步的研究，经人工培养多代后观察菌株的形态特征、部分生理生化特性分析。实验对亲本米曲霉、根霉、及其融合后的后代进行了传代培养。通过对亲本以及一、三、五、七代在生长时的形态特征进行定量分析，结果表明亲本和其杂交后代在培养基上生长都比较旺盛，菌体形状颜色都比较相似。测定蛋白酶、淀粉霉的活力，淀粉霉活力中亲本根霉的平均Hc值是1.527，亲本米曲霉的平均Hc值是1.518，而后代霉活最高的融合一代3的平均Hc值是1.781，最低的融合七代1的平

2、均Hc值是1.193。SDS电泳分析发现后代的条带大多比亲本少，说明后代与亲本存在一定差异。关键词：米曲霉；根霉；原生质体；酶活力；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳ABSTRACTThisexperimentisRhizopusoryzaeprotoplastswiththerestructuringofthedescendantsofageneforfurtherstudy,afterseveralgenerationsofartificialculturestrainswereobservedmorphological,physiologicalandbiochemicalcharacteris

3、ticsanalysis.ExperimentsontheparentAspergillus,Rhizopus,andtheirdescendantswerefusedsubculture.Byparents,andone,three,five,sevengenerationsinthegrowthmorphologywhenquantitativeanalysisshowsthatparentsandtheirhybridoffspringaremorevigorousgrowthmedium,thecellshapeofcoloraremoresimilar.Determinationof

4、protease,amylase,starchmoldactivityintheparentalRhizopusaverageHcvalueis1.527,theparentAspergillusaverageHcvalueis1.518,whilethedescendantsofmoldlivingthehighestintegrationofgeneration3,theaverageHcvalueis1.781,thelowestfusionsevengenerationsofanaverageHcvalueis1.193.FinallyitsSDSgelelectrophoresisa

5、nalysisshowedthatmostbandsoffuturegenerationslessthantheparents,offspringandparentsthattherearesomedifferences.Keywords:Oryzae;Rhizopus;Protoplasts;Activity;SDS-polyacrylamidegelelectrophoresis目录1前言11.1研究的现状11.2实验研究的意义22实验材料、试剂、设备和方法22.1实验材料22.2实验药品和试剂22.3实验仪器设备32.4主要溶液试剂及配制32.5其他实验材料42.6实验方法42.6.1菌

6、种活化42.6.2菌丝体培养52.6.3菌种融合过程52.6.4诱变原生质体62.6.5高产酶菌株的筛选62.6.6传代培养62.6.7形态观察62.6.8酶活测定62.6.9蛋白质提取72.6.10SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及分析73结果与分析83.1高产酶菌株的筛选83.2后代形态分析83.2.1平板培养基观察结果83.2.2显微镜观察结果103.2.3淀粉酶活观察结果113.2.4蛋白酶活观察结果123.3酶活测定结果与分析133.3.1不同菌种的蛋白酶活力测定结果与分析13I3.3.2不同菌种的淀粉酶活力测定结果与分析163.4SDS凝胶电泳183.4.1电泳扫描图183.4.2蛋白定

7、量分析203.4.3定量检验报告203.5蛋白质带分析243.6泳道中带分布报告253.7列相似性分析303.7.1相似性图表303.7.2亲本及其后代的聚类分析324小结32参考文献34I1前言1.1研究的现状米曲霉菌是一类重要的工业真菌，因能分泌多种酶类广泛用于食品发酵等行业，且应用领域仍在不断扩展。为了向米曲霉的安全应用提供更全面的参考信息，并希望从中寻找有药理活性的药物前体，本研究对米曲霉