MDA含量的测定SOP

《MDA含量的测定SOP》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、主要目的：——为了测定样品中的MDA含量，作为机体内脂质过氧化的程度的一个指标。主要原理：——测定原理为过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532nm波长下有最大吸收峰[100]。用酶标仪在532nm处测定吸光度（OD值），计算样品浓度。因底物为硫代巴比妥酸，所以此法称为TBA法。实验室签章一、试剂——无水乙醇（分析纯）——硫代巴比妥酸——冰醋酸——双蒸水——丙二醛（MDA）测定试剂盒（南京建成生物研究所）二、仪器设备——96孔酶标板——UV-Vis可见多功能酶标仪——旋涡混匀器——水浴锅——移液枪及相应量程枪头一、实验方法根据试剂盒说

2、明书具体操作步骤如下：1.向标准管0.1mL标准品，空白管加入0.1mL无水乙醇，测试管和对照管加入稀释后的血清或组织上清液0.1mL，然后各管中再分别加入0.1mL试剂一，摇动几下试管架晃匀，向各管中分别加入3mL的试剂二和1ml的试剂三，同时只向对照管中加入50%冰醋酸1mL。2.旋涡混匀器混匀，试管口用保险薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后4000转/分，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。3.血清中MDA含量计算公式MDA含量（nmol/mL）×标品浓度×样本前稀释倍数组织中MDA含量计算公式MDA含量（nmol/mgprot）×

3、标品浓度÷样品蛋白浓度（mgprot/mL）LuTC,KoYZ,HuangHW,etal.Analgesicandanti-inflammatoryactivitiesofaqueousextractfromGlycinetomentellarootinmice[J].Journalofethnopharmacology,2007,113(1):142-148.