丙二醛(MDA)含量的测定说课讲解.ppt

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1、丙二醛(MDA)含量的测定丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。原理硫代巴比妥酸丙二醛3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川）仪器设备分光光度计；研钵；剪刀；恒温水浴；试管：20mL×4离心机。试剂1.5%三氯醋酸；2.0.5%硫代巴

2、比妥酸（用5%三氯醋酸溶解定容）；3.0.05mol·L–1磷酸缓冲液，pH7.8。材料正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。方法与步骤1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5cm长的小段，混匀。2．称取叶片切段0.3g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂和2mL0.05mol·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3mL0.05mol·L-1磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。3．在提取液中加入5mL0.5%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。4．将试管放入沸水浴中煮沸10mi

3、n，（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15min，取上清液并量其体积。以0.5%硫代巴比妥酸溶液为空白测532nm、600nm和450nm处的消光值。计算结果式中，Vt：提取液总体积（mL）；Vs：测定用提取液体积（ml）；FW：样品鲜重（g）。注意事项1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532nm也有吸收（最大吸收在450nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。2．低浓度的铁离子能增强M

4、DA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5nmol·L-1）3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。思考题不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢