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《体外肝代谢系统的研究和应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、【摘要】肝药酶在药物代谢中具冇十分璽要的作用。对肝药酶的研究方法中，以动物肝脏或肝细胞为基础，构建体外肝代谢系统是体外代谢研究屮最重要的环节之一。对体外肝代谢的研究，主要是利用肝微粒体、基因重组CYP450酶系、肝细胞培养、肝组织切片及离体肝灌流系统等方法。本文综述近年国内外所应用的不同体外肝代谢系统，并对各体外代谢研究方法进行比较，指岀根据各系统的特性、不同的实验要求和目的,选择适当的研究方法的重要性。【关键词】细胞色素P450陋；肝微粒体；肝细胞培养;肝组织切片；离体肝灌流药物代谢(drugmetabolism)—般是指药物的牛物转化(drug
2、biotransformation)。药物经生物转化后，可引起药物的药理活性或/和毒理活性的改变。因此，研究药物的生物转化,明确英代谢过程，对新药开发、新剂型设计及制従介理的临床用药方案等方面都具冇重要的指导意义。肝脏是药物生物转化的重耍器官，含有参为药物代谢重要的酶系(细胞色素P450酶,cytochromeP450,CYP450)，该酶系参与药物及各种内源性和外源性化合物在体内的代谢过程。CYP450酶系由三十多种同工酶(亚型)组成,主要有CYP］、CYP2、CYP3三大家族［1］。木文所介绍的各种体外代谢系统均含有一种或多种CYP450酶的同
3、工酶,为研究药物体外代谢提供了研究的对彖和基础。动物肝体外代谢研究可以较好地排除体内因索干扰,直接观察酶对底物代谢的选择性，为整体试验提供可靠的科学依据。以肝脏为基础的体外代谢系统主要包括肝微粒体、基因重组CYP450(W系、肝细胞、肝组织切片及离体肝灌流。1肝微粒体1.1肝微粒体的制备多数采用差速离心法［2］,通过鬲速离心使微粒体与其他成分分离，操作简单，无需其他试剂辅助。但较耗时，设备要求高，使该法的普及和深入研究受到一定的限制。针对这些情况,可采用试剂辅助分离的方法［3］,在离心前额外加入一定比例的PEG6000或CaC12,促进微粒体沉降。
4、此法对设备要求降低，并缩愆了实验周期。肝微粒体的制备过程均应在4°C下进行。正确、合理地选择缓冲液，能起到良好介质的作用，按比例加入后进行肝组织的破碎和匀浆,才可有效分离肝微粒休和避免细胞器受损。1.2肝微粒体的主要应用1.2.1测定CYP450酶活性测定原理是在特定酶催化下，底物在辅助因子以及适合的温度、时间作用下反应,借助仪器测定生成的特定产物虽。由于反应可控和周期短，H前人多数P450酶以肝微粒体作为反应体系进行酶活性的测定［2］。各种酶活性测定的步骤基木相同，差别主要在于酶对应的底物和检测仪器的选择。一般以底物及代谢途经來命名各种酚,如7乙
5、氧基试卤灵0脱乙基酶(CYP1A1)［4］＞氯醴沙宗疑化酚(CYP2E1M5］等。根据底物特性选择检测仪器，常用的有紫外/荧光分光光度计,或联用HPLC系统。1.2.2考察药物对肝药齣活性的影响某些药物在体内不同程度地诱导或抑制肝药酶活性,这将影响到同时服丿IJ的其他药物的代谢,如抑制CYP3A活性的药物(如红霉索等)，若与其他经这一家族酶代谢的药物(如西尼地平等)同时服用，则可能减慢其代谢，从而增强药效或毒副作用⑹。近年来，关于考察屮药成分对肝药腮活性影响的报道增多，从体外分子水平來评价它们対肝代谢的影响，可为中药配伍提供依据。如代方国等⑺考察给
6、以□•草、廿遂、□遂W草配伍药液的大鼠的肝微粒体中CYP2E1的活性，发现甘草纽•和配伍组对CYP2E1活性的诱导作用显着高于甘遂组;甘遂可能通过诱导肝脏CYP2E1的衣达与活性上升;廿遂廿草配伍使用时，廿草对CYP2E1活性的诱导能力更强,故两者配伍吋,nJ促进甘遂所含前致癌物质和前毒物转化成为致癌物和毒物的过程，并导致对机体毒性作用的增强。1.2.3进行药物体外代谢途径研究将药物加入肝微粒体中进行孵育后，利用质谱检测离子碎片来鉴定代谢物的结构,包括药物不同位点上的轻化物或去烷基产物，从而确定代谢途径。冇报道指出⑻，新型抗焦虑药AF5加入人肝微粒
7、体屮进行孵育，经GCMS分析，鉴定出两种主要代谢产物:4梵基AF5(I)及4拨基AF5(II)oAF5在肝微粒体中代谢的主要产物为I,1在人肝微粒体中，可进一步转化为II,后者不再被代谢。1.2.4考察手性药物的代谢立体选择性周权等［9］把手性药物与人鼠肝微粒体相结合，对其立体选择性代谢作了详细的考察。作者把R/S普罗帕酮(propafenone,PPF)in入经地塞米松或P荼黄酮诱导的大鼠肝微粒体孵育,经提取及手性拆分后，进入HPLC系统分析。结果显示，与对照组相比，在经诱导的肝微粒体中,PPF的I相代谢呈显着的立体选择性。总之，改进后的体外肝微
8、粒体法耗时少，重现性好，易人量操作。适用于酶活性及体外代谢清除等方面的研究，在实际工作屮应用较广。但同其他体外川:代谢方法
