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1、DC-CIK治疗缓解后急性口血病6例报告刘清池吴维海牛景月武大勇冯新旺梁春耕李建英马传宝庞宇慧张慧敏李刚荣胡晓东张玉娜2000年在美国举行的“国际肿瘤生物治疗及基因治疗年会，哙议总结报告曾指出「生物治疗是目前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的世纪。”细胞免疫治疗是近年来肿瘤生物治疗屮的研究热点之一。近年来随着细胞免疫学和分子生物学的发展，细胞因子诱导的杀伤细flti（cytokineinducedkillercells,简称CIK）是一种高效、新型免疫活性细胞,CIK细胞用于治疗白血病
2、已经成为白血病过继免疫治疗的重要手段之一。树突状细胞（dendriticcells,DC）是廿前发现的功能最强的抗原提呈细胞,它通过处理、呈递抗原而介导机体免疫应答。由于许多白血病患者缺乏功能性DC而不能诱发抗原特异性T细胞应答,故在体外诱导功能性DC用于主动免疫治疗具冇重要的临床应用价值。DC-CIK是分别培养DC与CIK,然后再共同培养，使DC诱导CIK特异性应答，较单纯CIK更完善。现今口血病的缓解率已达70%以上，但多数患者最终因为残留白血病（MRL）的存在会复发而死亡。清除MRL是治愈白血病的关键。我们采用树
3、突状细胞调节联合细胞因子诱导的杀伤细胞（简称DC-CIK）治疗血液学缓解后口血病6例，取得较好临床疗效，特报告如卜1资料与方法1.1研究对象2004年12月至2006年3月期间，选择6例急性白血病患者（木组病例不含PML7RARa阳性急性髓系白血病）,均为血液学缓解期，血象、骨髓象正常，但未达分子生物学缓解。年龄20〜24岁，平均20.2岁。包括急性B淋巴细胞白血病（ALL）1例，化疗4年后仍持续IgH基因重排阳性，口体造血干细胞移植后IgH基因重排阳性B细胞型ALL1例,AML/ETO阳性急性髓性白血病2例,BCFB
4、/MYH11基因阳性急性髓系0血病1例。诊断标准按照WHO急性0血病诊断分型标准⑴。表1：6例患者临床资料病例性别年龄（岁）诊断病程（月）例1男24AML/ETO阳性急性髓性白血病8例2男23BCFB/MYH11基因阳性急性髓系白血病11例3男15IgH阳性急性B淋巴细胞白血病10例4男19Ig11阳性急性B淋巴细胞口血病48例5男20AML/ETO阳性急性髓系白血病25例6女27AML/ETO阳性急性髓系白血病301.2DC-CIK培养、扩增1.2.1DC、CIK细胞的体外分离：在平安医院细胞培养室完成用COBESP
5、ECTRA机按Auto-PBSC程序行血细胞分离採集外周血单个核细胞（MNC）o并用淋巴细胞分离液（Ficoll）再次分离出MNC，用AIM-V无血清培养基调细胞浓度为（4〜6）X10°个/ml，置于37°C、5%CO2培养箱中培养2h。收集非贴壁细胞用于诱导培养CIK细胞，贴壁细胞诱导分化出成熟DCo作者单位:050021右家庄平安医院血液科（刘淸池吴维海牛景月武大勇冯新旺梁春耕李建英马传宝庞宇慧张慧敬）；石家庄平安医院分子生物学实验室（李刚荣胡晓东张玉娜）通讯作者:刘清池,Emai:Iiuqingchi@sina.
6、com1.2.2CIK细胞培养、扩增：用含10%人AB血清的IMDM,将收集的菲贴壁细胞调细胞浓度为（1〜2）X106个/ml，并加入1000U/ml的IFN・a悬浮培养,24h后加入1ug/ml的CD3单抗和1000U/ml的rhIL・2,每隔3天半量换液1次，补充rhIL-2,调整细胞浓度始终为（1〜2）X106个/mlo1.2.3DC的体外培养、扩增：MNC培养2h后的贴壁细胞中，加入含1000U/ml的GM-CSF和1000U/ml的IL・4的AIM2V培养液,37°C、5%CO2培养箱培养。每3天换液1次并补
7、充细胞因子，第6天加入上述细胞因子的同时还加入IL-1B、TNF・a、PGE-2等细胞因子诱导DC成熟,共培养8〜9天。1.2.4DC与CIK细胞共培养：：收获的DC计数后和CIK,按1：5混合培养,共培养3天。DC/CIK细胞群表型检测在DC培养的第9天应用流式细胞仪进行免疫表型分析，在CIK细胞培养的第9、14、21天分别取少量细胞应用流式细胞仪测细胞表型,DC-CIK培养物共培养3天后测细胞表型。由平安医院分子生物学实验室完成，采用荧光标记的单抗（InternationalImmunotech公司）进行染色,用C
8、OULTEREPICSXL型四色流式细胞仪检测，用CellQuest软件分析数据。1.3DC-CIK细胞回输每次采集的细胞分3次培养后回输。做细菌、霉菌培养均阴性，活性细胞占95%，淋巴细胞比例>70%,则准备凹输DC-CIK细胞。将37°C恒温箱屮的DC-CIK回输液（约250mL）运至病房,立即快速静脉冋输。冋输前，地塞米松5
