第八章 血清型

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1、第八章血清型【目的要求】1、掌握HP、GC、TF的遗传特征2、熟悉HP、GC、TF的分型原理3、了解血清型的亚型第一节概述一、血清型的概念人类某些血清蛋白具有遗传多态性，表型有个体差异，称为血清型（serumtypes）二、血清型的分类与命名根据分型原理不同，血清型可以分为两大类：1、同种异型遗传标记是指同一种属不同个体免疫球蛋白抗原性的差别，可采用特异性抗血清分型。如免疫球蛋白Gm、Km等这类血清型的命名多以抗原所在的肽链名称加抗原编号组成。如Glm抗原表示该抗原位于免疫球蛋白IgG1γ重链上2、血清蛋白的电泳多态性遗传标记是指不同个体血清蛋白的电泳特

2、性的差异。是血清蛋白多肽链中部分肽链或个别氨基酸不同，引起电泳迁移率发生变化构成的多态性这类血清型的命名通常是蛋白的缩写名称加表示等位基因的数字或字母，如Hp1－1三、分型原理1、免疫学的方法可以用来进行同种异型遗传标记的分型，以特异性的抗体检测同种异型抗原，确定遗传标记的型别。如红细胞被动凝集抑制试验、酶联免疫分析等2、在法医学鉴定中应用的血清型多数属于电泳性质上的多态性，需要采用凝胶电泳技术分型其分型原理为：不同表型的蛋白质一级结构存在差异，分子量和等电点不同，在电场中的迁移率不同，可依据蛋白谱带位置进行分型等电聚焦技术则依靠不同蛋白分子之间等电点差

3、异进行分型，分辨率比常规凝胶电泳高，能够揭示许多普通电泳难以检出的多态性。如维生素D结合蛋白普通电泳分为三种表现型，而等电聚焦技术分为六种等电聚焦电泳原理：所有的氨基酸均为两性物质，在酸性溶液中带正电荷，在碱性溶液中带负电荷。若氨基酸在某一pH值下其净电荷为0，且在电场中不移动时，称此pH值为它的pI值（等电点）。当溶液的pH值低于或高于pI，所有蛋白质分子所带净电荷为同号，彼此之间有相斥力，不会聚集。所以，將pH调到等电点的大小，则大部份的蛋白质將会沉淀，可以应用在电泳，达到分离蛋白质混合物的目的，这种方法称为等电聚焦电泳3、有些血清型在分型之前，样品

4、需经神经氨酸酶或其他试剂处理，如转铁蛋白分型。因为糖蛋白糖侧链的电荷会影响蛋白电泳迁移率4、电泳后的血清型谱带的显示可以用普通蛋白染色、免疫固定或免疫印迹法蛋白染色操作简便，但谱带无特异性免疫固定后染色为特异性显色方法，主要是利用抗原抗体的特异性反应识别特异性蛋白典型的印迹实验包括三个步骤：①蛋白质的电泳分离②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上，用非特异性，非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一

5、。第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰酰凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1～2A），通电45min转移即可完成。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。几

6、乎任何蛋白质都可用于免疫印迹。免疫印迹的优势是能分析不能用其他的免疫化学技术进行研究的蛋白质样品。例如，不能标记的蛋白质或不溶于温和抽提缓冲液的蛋白质等6、DNA分型技术也可用于血清型分型。个体差异的实质是人类基因组编码DNA的差异四、法医学意义自1939年发现血清中Hp的遗传多态性以来，血清型因分型可靠，个体识别率高等原因受到法医学的重视，多种血清型成为亲子鉴定选择的遗传标记第二节结合珠蛋白型结合珠蛋白（haptoglobin，Hp）：是人血清中能与游离血红蛋白（Hb）结合的一种a糖蛋白。由三种表现型Hp1-1,Hp2-1，Hp2-2。受控于Hp座位

7、上的一对等位基因Hp1和Hp2,呈共显性遗传。一、Hp的生化性质与生物学功能由肝脏合成，等电点为4.1－4.2，电泳属于α2－球蛋白组分。含糖量为18.6％其主要功能是与游离血红蛋白结合成稳定的复合物，并很快被单核-巨噬细胞系统处理掉，阻止了血红蛋白从肾小球滤过，避免游离血红蛋白对肾小管的损害结合珠蛋白是一种血浆糖蛋白，分子量约为90.000。能与红细胞外血红蛋白(Hb)结合形成紧密的非共价复合物Hb-Hp。每天降解的Hb约有10%释入血循环中，成为红细胞外游离的Hb，Hb与Hp结合成Hb-Hp复合物后分子量可达155,000，不能透过肾小球，从而防止游

8、离血红蛋白从肾脏丢失，避免Hb所含铁的丢失。保证铁再用于合成代谢。溶血性贫血患