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1、泰妙菌素摇瓶发酵工艺优化研究吴致军张萍王果沙艳玲（宁夏多维药业有限公司菌种研究所，银川750006）［收稿日期］2008-8-25［文献标识码］［文章编号］［中图分类号］［摘要h泰妙菌素菌种采用正交实验设计对摇瓶发酵配方进行了优化，使得摇瓶效价（指发酵液中截短侧耳素含量）从4992ug/mL提高到T9850ug/mL,效价提高了97.32%,并对摇瓶发酵工艺进行了多方面摸索和调整，完成了引进泰妙菌索菌种的消化吸收。［关键词］:摇瓶效价；优化；止交实验设计抗生素菌种的摇瓶效价是标志菌种生产能力的重要指标，不仅是验证该菌种种子阶段菌种制备是否正常的依据，而且也是菌种选育过
2、程中用到的首要指标。菌种摇瓶效价止常与否，不仅影响原材料验证、工艺调整和止常牛产；而且也决定菌种选育的成与败。为此，我们对种子瓶制备小的菌丝铲取量多少及研磨程度进行研究，用止交实验设计对摇瓶发酵配方进行了优化“切，使得摇瓶效价在原工艺的基础上提高了97.32%,达到9850ug/niL,同时对发酵瓶的接种量、通气量及培养周期对摇瓶效价的影响进行了深入研究叫完成了引进菌种的消化吸收工作。1.材料与方法：1.1菌种：U-20080314①宁夏多维药业有限公司国外引进。1.2仪器设备：Waters600高效液相色谱仪（2487型紫外检测器）,美国Waters公司;TDL-5
3、-A型台式离心机;JA203型电了天平，上海海康电了仪器厂;pIIS-3C精密pH计，上海精密科学仪器有限公司；SPX-250B-Z型牛化培养箱，上海博迅实业有限公司医疗设备厂1CX31RBSF型显微镜，菲律宾奥林巴克公司；组织研磨器以及其它实验室常用的仪器设备。作者简介：吴致军（1962年-），男，抗主素专业高级工程师、执业药师，主要从事抗生素生产菌种的制备、保藏和菌种选育工作。E-mail:wzj962@l63.com1.3原材料：荷萄糖，天京市瑞金特化学品有限公司；玉米浆，华北制药廉欣有限公司；酵母膏，北京奥博星生物技术冇限责任公司；黄豆粉，银川市荷兰县豆饼粉厂
4、；豆油，西安邦琪油脂公司；MgSO4・7HQ,天津市大茂化学试剂厂；Ca（NO3）2・4比0,天津市大茂化学试剂厂；KHfO；,天津市永大化学试剂开发中心;NaCl,天津市化学试剂六厂。1.4试剂和溶液：卬醇：色谱纯乙腊：色谱纯水：纯化水氢氧化钾：分析纯0.02mol/L磷酸缓冲液：称取2.72g磷酸氢二钾到950mL纯化水中，用5%氢氧化钾溶液调pH=7.2,将溶液移至lOOOmL容量瓶，并用纯化水稀禅至刻度。截短侧耳索标准样品：已知含量295.0%1.5仪器：高效液相色谱仪：Waters2695/2487色谱柱：Waters4.6X250mm不锈钢柱，5umSym
5、metry®C）81・6效价测定方法:截短侧耳索是一种二话烯类抗生素，从截短侧耳素经半合成可得到延胡索酸泰妙菌素。通过用高效液相色谱法测定发酵液屮的截短侧耳素含量作为摇瓶效价。批注I微软用户1］：此部分内容建议放到1材料项下，编号为1.4和1.5,其他顺序调整。1.6.1操作条件：流动相为甲醉T%碳酸镀溶液（6:4,V/V）；流速：1.OmL/min；检测波长:212nm；进样量：20卩L。截短侧耳索&02min1.6.2标准样液的制备:称取0.02g标准品，于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并圮容，摇匀即得标准样液。1.6.3试样测定液的制备：取发酵液2mL,于lOOm
6、L浸提瓶中，加入18mL甲醇,用胶塞塞上瓶口,在240转/分的摇床上振荡3h后过滤，用一次性注射器吸取2mL滤液，用针头过滤器（0.45um）压滤，所得滤液即为试样测定液。1.6.4测定：在上述测定条件下，待仪器稳定后，用进样器取试样测定液和标准测定液分别注入色谱仪屮，进行测定。1.6.5效价的计算：标准胡质量（g）x标准胡截短侧耳素百分含量x样晶峰面积摇瓶效价（Pg/mL）二X106标准品峰面积.1.7菌丝斜面的制备：用无菌的不锈钢铲在无菌条件下铲取2伽2左右的菌丝体,加入组织研磨器，加入4mL无菌水充分研磨后，用lniL吸管吸取0.2mL接种茄瓶斜面，置温度25°
7、C,湿度50-55%的培养箱屮培养10-12天后，将其保存在4°C冰箱中备用。1.8种了瓶菌丝的制备：用无菌的不锈钢铲在无菌条件下铲取2（3〃左右的菌丝体，加入组织研磨器，加入4汕无菌水充分研磨后以10%的接种量接种种子瓶，置温度25°C,湿度40-50%,转速为240转/分钟的摇瓶机上振荡培养48-72h,用于转接发酵瓶。1.9发酵瓶的培养：用培养好的种子瓶菌丝，以10%的接种量转接发酵瓶，3温度25°C,湿度40-50%,转速为240转/分钟的摇瓶机上振荡培养192h左右放瓶。2.结果2.1菌丝量多少及研磨程度对种子瓶生长的影响泰妙菌索在种子瓶制
