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1、《生物化学》实验指导书适用专业：生物技术、生物工程、食品科学与工程生物与食品工程学院生物科学系生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。1.实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。2.严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。非本实验组的同学不准进入实验室。3.进入实验室必须穿实验服。各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。绝对禁止用实验仪器或药物开玩笑。4•实验中
2、应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。5.实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法,使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。6•使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。7.做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。8.实验后，要及时完成实验报告。2006年1月生物化学实验细则实验1蛋白质的沉淀、变性反应实验2醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白实验3SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量
3、•••11实验4凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量16实验5DNA的琼脂糖凝胶电泳20实验624实验7生物氧化与电子传递25实验8植物体内的转氨基作用27实验1蛋白质的沉淀、变性反应(3学时)目的要求1.加深对蛋口质胶体溶液稳定因素的认识。2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。3.了解蛋白质变性与沉淀的关系。原理在水溶液中，蛋白质分子表面形成水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是冇条件的，相对的。在一定的物理化学因索影响F,蛋口质颗粒失去电荷，脱水，其至
4、变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋口质的沉淀反应。这种反应可分为以下两种类型：1・可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子内部、空间结构并未发生显著变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去后，能再溶于原來的溶剂中。这种作用称为可逆沉淀反应。如大多数蛋白质的盐析作川或在低温卜•用乙醇(或丙酮)短时间作用于蛋口质以及利用等电点的沉淀，提纯蛋片质时，常利用此类反应。2.不可逆沉淀反应在发生沉淀反应吋，蛋白质分子内部结构、空间构彖遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。这种变性蛋白质的
5、沉淀不能再溶解于原來溶剂中的作用称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂，强酸、强碱、加热、震荡、超声波、冇机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。蛋白质变性后，冇时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷)并不析出，因此，变性蛋白质不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。试剂和器材一、试剂1.蛋白质溶液：10ml/组取5ml鸡或鸭蛋清，丿1J蒸憎水稀释至100ml,搅拌均匀后川4-8层纱布过滤，新鲜配置。2.蛋口质氯化钠溶液：3ml/组取20ml蛋清，加蒸饰水200ml和饱和氯化钠溶液100ml,充分搅匀后，以
6、纱布滤去不溶物(加入氯化钠的II的是溶解球蛋白)。1.其余试剂：硫酸鞍粉末(10克/组)，饱和硫酸鞍溶液(150ml),3%硝酸银(280ml),0.5%乙酸铅(200ml),浓硫酸(5ml/组,5%磺基水杨酸(100ml),0.1%硫酸铜(100ml),饱和硫酸铜溶液(400ml),0.1%乙酸(500ml),10%乙酸(5()()ml),饱和氯化钠溶液(25ml),10%氢氧化钠溶液(500ml)。二、器材试管(15支/组)，过滤漏斗(1个)，试管架1个/组，玻璃棒1支/组，沸水浴4台，最筒（总需要20mlX1,20
7、0mlXI）,烧杯（总需要100mlX2,400X2）,WJ瓶（12个/组，附胶头滴管10支/组）,移液管（5mlX6/组，lmlX3/组），滤纸1盒，洗瓶1个/组，废液缸1个/组,药匙1个/组，移液管架1个/组操作方法-、蛋口质的可逆沉淀反应一蛋口质的盐析作用（分级盐析）3ml蛋白质氯化钠溶液3ml饱和硫酸钱混匀^'SlOminI硫酸铁粉末过滤滤液►静置弃去清液1搅拌至饱和<7O仃，球蛋白沉淀凶一►清蛋白沉淀一畿二、蛋白质的不可逆沉淀反应1.重金属沉淀蛋口质3—4滴加彦汨沱水■观察況淀<3%硝酸银纵祭仇征是否溶解3—4
8、滴百炭］f宀过量饱和0.1%硫酸铜纵祭仇丫疋a硫酸铜观察沉淀杲否溶解2.酸沉淀蛋白质1)0・5ml蛋白质溶液数滴5%磺基水杨观察蛋白质沉淀水■观察沉淀—杲否溶解2)10滴浓硫酸6滴蛋白质溶液不要摇动观察两液摇动试管界面►观察现象3.加热沉淀蛋口质取5支试管，编号，按下表加入冇关试剂（单位/滴）。管号蛋口质溶液（）」％
