杨应凤30毕业论文

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1、杨应凤30毕业论文（《中国图书资料分类法》分类号）：R3单位代码：10660学号：07001001030贵阳医学院基础医学院2012届基础医学（生物技术方向）专业本科学位论文德国小嫌过敏原Biag8基因的克隆及原核表达学生：杨应凤年级：07级专业：基础医学（医学生物技术）指导教师：张春林教授、王赞讲师、龙高群实习单位：贵阳医学院生物学教研室2012年5刀3日-1-德国小嫌过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达冃录摘要51.前言62.材料与方法72.1材料72.1.1物种來源72.1.2主要试剂72.1.3主要仪器82.1.4生

2、物信息学分析软件92.2方法92.2.1部分序列的获取92.2.2RACE获得全长序列92.2.2.15'RACEPCR引物的设计2.2.2.2RACERNA的准备及逆转录获得第1链cDNA102.2.2.35'RACEPCR扩增及检测102.2.2.45'RACEPCR产物的纯化122.2.2.5大肠杆菌感受态细胞的制备122.2.2.6PMD18-T-Blag8重组质粒的连接转化13-2-德国小嫌过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达2.2.2.7阳性克降的筛选142.2.2.8菌液PCR验证及取菌液PCR测序142.2.

3、2.9拼接获得全长序列及搜索其0RF142.2.3全长克隆142.2.3.1全长引物的设计142.2.3.2PCR扩增及纯化142.2.3.3感受态细胞的制备152.2.3.4连接及转化152.2.3.5重组质粒的提取、转化表达菌BL21及阳性克隆的筛选……162.2.4全长DNA序列的生物信息学分析及功能预测172.2.5重组蛋白的表达与纯化172.2.5.1IPTG诱导预表达182.2.5.2SDS-PAGE检测182.2.5.3重组蛋白可溶性的分析192.2.5.4重组蛋白表达条件的优化192.2.5.5重组蛋白的大量

4、表达202.2.5.6重组蛋白的纯化212.2.5.7表达产物的检测223.结果分析222.1PCR扩增反应222.2重组质粒转化鉴定结果23-3-徳国小嫌过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达2.3Biag8全长序列测序及生物信息学分析243.3.1Biag8全长序列测序结果243.3.2Biag8测序所得序列生物信息学分析252.3.3Biag8变应原性的分析292.4重组蛋门的预表达结果312.5重组蛋白可溶性的分析结果322.6重组蛋口的表达优化结果332.6.1重组蛋口的时间诱导表达优化结果332.6.2重组蛋白的1

5、PTG浓度诱导表达优化结果332.7重组蛋白的纯化342.8重组蛋白纯化后的免疫卬迹353.讨论与结论36参考文献39致谢41-4-徳国小嫌过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达徳国小嫌过敏原Biag8基因的克隆及原核表达【摘要】U的：克隆德国小赚变应原Biag8的完整cDNA编码序列，并通过生物信息学预测具结构和功能；成功原核表达徳国小«Blag8重组变应原。方法：通过blast搜索，获得徳国小«Blag8部分序列，通过RACE(rapid-amp1ificationofcDNAends)技术获得编码Biag8的全长cDNA

6、序列,采用化物信息学方法推导出该序列编码的氨基酸序列及其理化性质，并对其预测信号肽、蛋白疏水性、可溶性、跨膜区结构、二级结构、三级结构及抗原表位。结果：获得编码徳国小嫌变应原Biag8的完整cDNA序列,含618bp编码205个氨基酸,推测分子式为C971H1543N269O324S6,并成功原核表达徳国小Biag8重组变应原。结论：木实验室首次获得德国小嫌过敏原Bbg8基因的全长序列，通过生物信息学分析获得了该蛋白的分了特征，并预测了其结构和功能及抗原表位优势区域，为进一步研究其变应原性奠定基础。关键词：徳国小蛛；变应原；

7、RACE；克隆表达；生物信息学Abstract：ObjectiveTheaimofthispaperistoobtainthefull-lengthcDNAofBiag8,andtoexpressrecombinantproteinoftheBiag8.MethodsOnbasisofthefragmentofBiag8fromGenBankbyBlastsearch,weobtainedthefull-lengthcDNAofBiag8byusingRACEandanalyzedthephysicalcharacteris

8、tics,hydrophobicties,transmembranedomain,secondarystructures,tertiarystructureandB-cellepitopesofBiag8bybioinformaticsmethods・Mcanwh订®wesuccessfu