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1、风湿安泰片中马兜铃酸A的HPLC限量检查丁爱英山高玉秋⑵李艳茹山曲佳[1]康樱樱[1]陈艳秋[1]作者1吉林益民堂制药有限公司1360012四平市中心医院136(X)0摘要：目的建立HPLC法测定风湿安泰片中马兜铃酸A的方法。方法：采用RP-HPLC法测定。用ShimadzuCig色谱柱(250mmX4.6mm,5Um)，以甲醇■水■冰醋酸(59：40：1)为流动相，流速为1ml/min,检测波长250nm,柱温为室温，进样量为10卩1。结果马兜铃酸A的保留时间约为32分钟，与其他峰的分离度大于1.50马兜铃酸A的线性范围为1.03
2、8ug/ml-127.6ug/ml,¥=0.9998,最低检测限为5.34XW3ug(信噪比为3：1),平均回收率为98.682%(n=5)0结论该方法简便快速，结果准确可靠，可用于风湿安泰片小马兜铃酸A的测定，马兜铃酸A未检出。关键词：风湿安泰片；马兜铃酸A；高效液相色谱风湿安泰片是以主川乌、牛草乌、细辛等二十五味药材为原料提取制得的纯中药制剂,具有舒筋活血，祛风镇痛的作用。用于筋骨麻木，手足拘挛，腰腿疼痛，风湿性关节炎等症。细辛中含冇马兜铃酸A。马兜铃酸A具冇蓄积毒性，长期或大虽服用或导致严重的肾毒性、肝毒性等，因此，监测马兜铃
3、酸A对于保障风湿安泰片的用药安全性具有重耍的意义。本实验是在建立风湿安泰片屮马兜铃酸A鉴别的基础上，采用HPLC法测定了其限度，低于于最低检测限度，可视为未检岀。1仪器与试药口木岛津LC-2010A高效液相色谱仪，LC-10Avp检测器，LC-solution色谱工作站。T醇为一级色谱纯，其他试剂均为优级纯。风湿安泰片由吉林益民堂制药有限公司生产，马兜铃酸A(批号为110746-200305)对照品购于中国药品生物制品检定所。2方法和结果2.1色谱条件:色谱柱:Shimadzu型液相色谱柱(ShimadzuCig,250mmX4.6
4、mm,5Um)；以甲醇冰■冰醋酸(59：40：1)为流动相,流速为1ml/min,检测波长250nm,柱温为室温，进样量为5口1。2.2对照溶液的制备：収马兜铃酸A対照6.38mg,精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取2.5ml置10ml量瓶屮，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.3供试品溶液的制备：取风湿安泰片20片，除去薄膜衣，研细，取约5g,精密稳定,加甲醇50ml,超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5%氢氧化钠溶液15ml溶解，用6mol/L盐酸溶液调节PH至2,滤过，滤液转移至分液漏斗
5、屮，用正已烷萃取两次(10ml、10ml),萃取后的水溶液用三氯甲烷振荡萃取4次(10ml>10mk10ml、10ml),合并萃取后的三氯甲烷溶液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。2.4色谱系统性试验：照上述色谱条件，分别取对照品、细辛药材、供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见附图1・3。可见，风湿安泰片供试品色谱图屮，在与马兜铃酸A对照品色谱相应的位置上，无相同保留时间的色谱峰，而细辛药材色谱图屮，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保昭时间的色谱峰。马兜铃酸A的保帘时间约为32分钟，理论塔板
6、数以马兜铃酸A峰计不低于3000,4050min2030图1马兜铃酸A对照品020304050min图2细辛药材222一:一9一8OOU6ssss=A.is_*亘密一,8一一一桑50cSLOT50min图3风湿安泰片2.5线性关系考察:取马兜铃酸A分别配成1.038ug/ml>1.110pg/mK1.276ug/mb1.595ug/ml>6.38ug/ml、127.6yg/ml六种不同浓度的对照溶液,按上述色谱条件依次进样，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y二48352.05X-66881.77,
7、和关系数为Y二0.999&结果表明，马兜铃酸A浓度在1.038Pg/ml-127.6ug/ml与峰面积有良好的线性关系。2.6最低检测限：在信噪比S/N=3时，最低检测限为5.34X103ugo2.7重现性考察:取20061001批号样品按上述供试品溶液制备方法制备,分别取5P1,连续进样5次，结果表明，供试品溶液的色谱图上在32分钟左右没有相应的峰出现。说明风湿安泰片的马兜铃酸A未检岀，重现性良好。2.8精密度试验:精密吸取对照品溶液5u1,重复进样5次，测定峰面积，结果马兜铃酸A的峰面积RSD为1.79%。2.9回收率试验：采取
8、加样回收法。精密量取批号为20061001的样品5g5份，分别加入马兜铃酸A对照溶液适量，制备供试品溶液，进样，按上述色谱条件测定峰面积，计算回收率,结果马兜铃酸A的平均回收率为102.68%,RSD为1.72%。2.10稳定性试验:
