茶树上冰核活性细菌的分离鉴定及防治

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1、冰核活性细菌(icenucleationactivebacteria•简称INA细菌)是自然界广泛存在的一类微生物-在没有冰核活性细菌存在的条件下•植物可以耐受・6~・7°C的低温而不发生冻害•而当冰核活性细菌存在于植物上时，可在・2~・3°C下被诱发植物细胞水结冰而发生霜冻，。这证明了冰核细菌是诱发和加重植物霜冻的重要因素。茶树原产于我国西南较为温暖湿润的地带・抵御低温的能力不强。在INA细菌存在的情况下，其对低温的抵御能力更加弱。从微生物的角度研究茶树抗寒性为茶树抗冻提供了一种重要的途径。本实验通过对一株从茶树上分离的冰核活性细菌进行鉴定、药剂防除以及拮抗菌防治•从茶树微生

2、物的角度为茶树抗冻提供理论依据。本实验于2009年11月气温降低时从大杨店安徽农业大学实验基地茶园取样，取样范围覆盖整个茶园，不以茶树种类为取样标准。实验从样品中分离到一株INA细菌，该菌株在・5°C下在2min内冻滴率达到85%，—个冰核产生需要的细胞数约为5.4x103个，该菌株具有较强的冰核活性。经总DNA提取，PCR扩增16SrDNA序列对比分析•该菌株与蔦短小杆菌(Curtobacteriumflaccumfaciens)具有极高的同源性*达到99%°根据GenBank上inaQ基因序列(登陆号：EU360731)保守序列设计引物*PCR扩增出冰核基因的片段，经Gen

3、BankBLAST比对证明与来自丁香假单胞菌丁香亚种(P.syringaesubsp.syringae)的inp基因具有较高同源性°在・5°C条件F，抑菌圈实验结果为：次氯酸钙＞亚甲蓝〉Tween80＞藏红；破坏INA细菌冰核活性物质效果为次氯酸钙最佳・其他几种试剂效果不明显；药剂触杀INA细菌结果为：次氯酸钙〉藏红〉亚甲蓝〉Tween80。结果与文献报道的含氯化合物抗INA细菌具有的效果一致。本实验在同一生态条件下的土壤中分离出一株拮抗菌，经PCR扩增16SrDNA反应与序列分析鉴定该菌株为黄孑包原毛平革菌｛Phanerochaetechrysosporium)°尖键词冰核活

4、性细菌；鉴定；药剂防除；拮抗菌AbstractIcenucleationactivebacteria(referredtoasINAbacteria)isawidespreadclassofmicroorganismsinthenature,itcaninducewaterfrostinplantcellsunder・2~・3°C,howeverwithouttheexistenceofINAbacteriaplantsresistanttheriskoffrostdamageunder・6~-7°Clowtemperature.Thisprovesthattheicenucl

5、eationbacteriaisanimportantfactorthatinduceandincreasefrostdamage.TeaplantoriginatedinChina'ssouthwestwhereismorewarmandhumidareas,itisweaktowithstandlowtemperatures.InthepresenceofINAbacteria,itsresistancetolowtemperatureisweaker.Researchonthepointofmicrobiologicalprovidesanimportsntwayofre

6、sistancetotheteafreezingdamage.Throughthisexperimentonastrainoficenucleationactivebacteriaseparatedfromtheteaplant,wedididentify,medicamentcontrolandantagonistcontroltothestrainofINAbacteria,itprovidestheoreticalbasisforantifreezenfromtheperspectiveofmicro-organismstoteaplant.Inthisstudy,wes

7、ampledfromtheteaplantwhenthetemperaturedecreasedinNovember2009,thesamplingcoveringtheentireteagarden,nottotheteatypesassamplingcriteria.WeisolatedonestrainofINAbacteriafromsamples,thestrain'sdripreached85%frozenrateunder・5°Cin2min,anicenucleicellne