茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治

《茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、安徽农业大学硕士学位论文茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治姓名：孙健申请学位级别：硕士专业：遗传学指导教师：江吕俊2011-06摘要冰核活性细菌（icenucleationactive bacteria，简称INA细菌）是自然界广泛存在的一类微生物，在没有冰核活性细菌存在的条件下，植物可以耐受6~7℃的低温而不发生冻害，而当冰核活性细菌存在于植物上时，可在2~3℃下被诱发植物细胞水结冰而发生霜冻，。这证明了冰核细菌是诱发和加重植物霜冻的重要因素。茶树原产于我国西南较为温暖湿润的地带，抵御低温的能力不强。在INA 细菌存在的情况下，其对低温的抵

2、御能力更加弱。从微生物的角度研究茶树抗寒性为茶树抗冻提供了一种重要的途径。本实验通过对一株从茶树上分离的冰核活性细菌进行鉴定、药剂防除以及拮抗菌防治，从茶树微生物的角度为茶树抗冻提供理论依据。本实验于2009 年11 月气温降低时从大杨店安徽农业大学实验基地茶园取样，取样范围覆盖整个茶园，不以茶树种类为取样标准。实验从样品中分离到一株INA细菌，该菌株在5℃下在2min内冻滴率达到85%，一个冰核产生需要的3细胞数约为5.4×10 个，该菌株具有较强的冰核活性。经总DNA提取，PCR扩增16S rDNA序列对比分析，该菌株与蔫短小杆菌（Curt

3、obacterium flaccumfaciens）具有极高的同源性，达到99%。根据GenBank上inaQ基因序列（登陆号：EU360731）保守序列设计引物，PCR扩增出冰核基因的片段，经GenBank BLAST比对证明与来自丁香假单胞菌丁香亚种(P.syringae subsp.syringae)的inp基因具有较高同源性。在5℃条件下，抑菌圈实验结果为：次氯酸钙＞亚甲蓝＞Tween80＞藏红；破坏INA 细菌冰核活性物质效果为次氯酸钙最佳，其他几种试剂效果不明显；药剂触杀INA 细菌结果为：次氯酸钙＞藏红＞亚甲蓝＞Tween80。结

4、果与文献报道的含氯化合物抗INA细菌具有的效果一致。本实验在同一生态条件下的土壤中分离出一株拮抗菌，经PCR扩增16S rDNA反应与序列分析鉴定该菌株为黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。关键词冰核活性细菌；鉴定；药剂防除；拮抗菌-I-AbstractIcenucleationactive bacteria (referred toasINAbacteria) isa widespread classofmicroorganismsinthe nature,itcaninduce waterfrost i

5、nplantcellsunder 2~ 3 ℃,however without the existence ofINAbacteria plantsresistantthe risk offrost damageunder 6 ~ 7 ℃low temperature. Thisprovesthatthe icenucleationbacteria isanimportant factorthatinduceand increase frost damage.Teaplantoriginated inChina'ssouthwestwhere 

6、ismore warmand humid areas,itisweak towithstand low temperatures.Inthe presenceofINAbacteria,itsresistance tolow temperature isweaker.Researchonthe pointofmicrobiologicalprovidesan importantwayofresistantcetothe teafreezing damage.Throughthisexperimentona strainoficenucleati

7、onactive bacteria separated fromthe teaplant,wedid identify,medicamentcontroland antagonistcontrolto the strainofINAbacteria, itprovidesthe oreticalbasisforantifreezenfromthe perspective ofmicroorganismsto teaplant.Inthisstudy,wesampled fromthe teaplantwhen the temperature d

8、ecreased in November 2009,the sampling covering the entireteagarden,nottoth