基因定位与克隆

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1、基因的定位与克隆千奇百怪的突变体这些突变体是怎么产生的呢？突变体:是某个性状发生可遗传变异的材料，或某个基因发生突变的材料。水稻获得突变体的方法：1.1自发突变1.2物理、化学诱变1.3插入突变法：T-DNA插入法；转座子法到底是哪个基因突变而引起对应性状的改变呢？？就需要进行基因定位基因定位（mapping）：是用一定的方法将基因确定到染色体上的实际位置。水稻中已克隆的重要基因水稻白叶枯病抗性基因Xa21水稻分蘖控制基因MOC1水稻脆秆控制基因BC1水稻半矮秆基因SD1水稻抽穗期基因Hd1水稻糊化温

2、度控制基因ALK水稻抗稻瘟病基因Pi-b一、连锁分析（Linkageanalysis）1）概念：基因定位的连锁分析是根据基因在染色体上呈直线排列，不同基因相互连锁成连锁群的原理，即应用被定位的基因与同一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的特点进行定位。2）重组值（recombinationfraction）是基因定位时两个基因间遗传图距的量度，即基因间的遗传距离。如果两个基因间有1%的重组值，其遗传图的距离为1厘摩。（centimorgan，cM）交换值(RF)(%)=重组型的配子数/总配子数×100%

3、重组值越大，说明两基因间的距离越远，基因间的连锁强度越小；重组值越小，说明基因间的距离越近，基因间的连锁强度越大。3）遗传标记（geneticmarker）用连锁分析发法进行基因定位需要已知的DNA序列作为遗传标记，这些标记按孟德尔方式遗传，标记位点应是多态的。4）遗传多态性：是指在一个遗传座位上具有一个以上的等位基因，且各个等位基因在群体中出现的频率皆高于1%。二、三点测交(three-pointtestcross)与染色体作图为了进行基因定位，摩尔根和他的学生Sturtevant创造了三点测交方法

4、，即将3个基因包括在同一次交配中。进行这种测交，一次实验就等于3次两点试验。已知在果蝇中棘眼(ec)、截翅(ct)和横脉缺失(cv)这3个隐性突变基因都是X连锁的。把棘眼、截翅个体与横脉缺失个体交配,得到3个基因的杂合体ecct+/++cv(ec、ct、cv的排列不代表它们在X染色体的真实顺序)，取其中3杂合体雌蝇再与3隐性体ecctcv/Y雄蝇测交，测交后代如下表。序号表型实得数1ecct+2125亲本型2++cv22073ec+cv273单交换I型4+ct+2655ec++217单交换II型6+c

5、tcv2237+++5双交换型8ecctcv3合计5318ecct+/++cv×ecctcv/Y测交后代数据结果分析1、归类2、确定正确的基因顺序用双交换型与亲本类型相比较，发现改变了位置的那个基因一定是处于中央的位置，因为双交换的特点是旁侧基因的相对位置不变，仅中间的基因发生变动。于是可以断定这3个基因正确排列顺序是eccvct。亲本型ecct+++cv双交换型+++ecctcvecct+++cvec+ct+cv+ctec+++cvec+++ctcveccvct+++ct+++eccv3、计算重组值

6、，确定图距(1)、计算ct—cv的重组值忽视表中第一列(ec/+)的存在，将它们放在括弧中，比较第二、三列：(ec)ct+2125非重组(+)+cv2207(ec)+cv273非重组(+)ct+265(ec)++217重组(+)ctcv223(+)++5重组(ec)ctcv3ct—cv间重组率=(217+223+5+3)/5318=0.084=8.4%=8.4cM(2)、计算ec—cv的重组值忽视表中第二列(ct/+)的存在，将它们放在括弧中，比较第一、三列：ec(ct)+2125非重组+(+)cv2

7、207ec(+)cv273重组+(ct)+265ec(+)+217非重组+(ct)cv223+(+)+5重组ec(ct)cv3ec—cv间重组率=(273+265+5+3)/5318=10.2%=10.2cM(3)、计算ec—ct的重组值忽视表中第三列(+/cv)的存在，将它们放在括弧中，比较第一、二列：ecct(+)2125非重组++(cv)2207ec+(cv)273重组+ct(+)265ec+(+)217重组+ct(cv)223++(+)5非重组ecct(cv)3ec—ct间重组率=(273+2

8、65+217+223)/5318=18.4%=18.4cM4、绘染色体图eccvct10.28.418.418.6在计算ec—cv和cv—ct的重组值时都利用了双交换值，可是计算ec—ct时没把它计在内，因为它们间双交换的结果并不出现重组。所以ec—ct之间的实际双交换值应当是重组值加2倍双交换值。即18.4%+2×0.1%=18.6%。当三点测交后代出现8种表型时,表明有双交换发生,此时需用2倍双交换值来作校正。若3个基因相距较近，往往不出现双交换类