《基因定位与克隆》PPT课件

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1、医学遗传学基因定位与克隆本章节重点基因定位和基因克隆的概念连锁分析遗传标记基因克隆的策略基因定位(genemapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。1911年，Wilson将红绿色盲基因定位到X染色体1968年，Duffy血型基因定位于1号染色体基因克隆(genecloning)：用一定的方法把不同位点上的基因分离出来。基因定位(genemapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。连锁分析(linkageanalysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座

2、位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。连锁分析连锁分析连锁分析连锁分析连锁分析连锁分析重组值(recombinationfraction)：是基因定位时两个基因间遗传图距的量度，即基因间的遗传距离。厘摩(centimorgan，cM)连锁分析遗传标记用连锁分析法进行基因定位时需要的一些已知遗传位点，这些位点应按孟德尔方式遗传，且具有多态性以便显示连锁关系，这些标记位点称为遗传标记（geneticmarker）。血型，血清蛋白，HLADNARFLPDNASTR&DNAVNTRSNP遗传标记重组值＝0

3、：10个减数分裂重组值＝0.3：85个减数分裂遗传标记连锁分析EcoRⅠEcoRⅠEcoRⅠ3.0kb1.7kb探针Neurofibroma,NF1RFLPⅠⅡⅢ121234567812345678连锁分析Neurofibroma,NF1RFLPⅠⅡⅢ1212345678123456783.0kb1.7kb4.7kb连锁分析4.7kb3.0kbNeurofibroma,NF1RFLPⅠⅡⅢ121234567812345678连锁分析Neurofibroma,NF1RFLPⅠⅡⅢ1212345678123456784.7

4、kb3.0kb连锁分析1955，Morton:优势对数法(Lod)+3表示连锁存在-2表示连锁不存在连锁分析多点连锁定位利用三点杂交法(threepointcrosses)，可将某一致病基因定位于遗传标记的框架内，更精确的进行基因定位。连锁分析子代类型重组位置数目ABC/abc非重组体853abc/abcABc/abc(A，B)–×-C5abC/abcaBC/abcA–×–(B，C)47Abc/abcAbC/abcB–×–(A，C)95aBc/abc多点连锁定位体细胞杂交(somaticcellhybridizatio

5、n)又称细胞融合(cellfusion)，是将两个同种和/或不同种的细胞融合成一个新细胞，即杂种细胞(hybridcell)。病毒诱导的细胞融合——仙台病毒化学融合技术——聚乙二醇(PEG)电融合技术——电穿孔法体细胞杂交体细胞杂交异核细胞体细胞杂交体细胞杂交合核细胞杂种细胞两个同种的动物细胞融合后形成的杂种细胞，细胞核一般保留双亲的染色体；不同种动物的细胞融合后，细胞核含有双亲的的染色体，但随着增殖传代的过程，会出现保留一方染色体，另一方染色体逐渐丢失的现象。体细胞杂交HAT选择系统1962，人类HPRT-1964，

6、小鼠TK-H：次黄嘌呤(hypoxanthine)A：氨基喋呤(Aminopterin)T：胸腺嘧啶(Thymidine)HPRT－TK－HAT选择系统TK－HPRT－HAT选择系统HAT选择系统体细胞杂交TK:chromosome17杂种细胞克隆嵌板HybridcloneHumanchromosome12345678A++++----B++--++--C+-+-+-+-微细胞融合(microcellfusion)体细胞杂交人工建立的仅含有一条人类染色体的杂种细胞，即微细胞，再与啮齿类细胞进行融合。区域定位(regio

7、nalassignment)体细胞杂交依据染色体结构畸变的特点，建立只含有特殊的部分人类染色体的杂种细胞，再与啮齿类细胞进行融合。辐射杂种(radiationhybrid)体细胞杂交用含有辐射切割的人类染色体片段的细胞与啮齿类细胞融合产生的杂种克隆细胞。1975年，Goss和Harris提出1990年，Cox构建单染色体杂种细胞1994年，Walter建立全基因组放射杂种原位杂交(InSiteHybridization，ISH)：利用同位素标记的DNA探针，与玻片上的中期染色体进行杂交。是一种直接进行基因定位的方法。原

8、位杂交技术原位杂交技术荧光原位杂交(FISH)：用特殊的荧光素标记DNA探针，与玻片上的染色体或细胞组织标本进行杂交。原位杂交技术原位杂交技术网络定位http://www.ncbi.nlm.nih.govhttp://genome.ucsc.edu基因克隆(genecloning)：用一定的方法把不同位点上的基因分离出来。基因克隆