基因定位与克隆ppt课件

《基因定位与克隆ppt课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、基因定位与克隆基因定位或基因制图(genemapping)：人类的基因定位或基因制图(genemapping)是近年来发展最快的领域之一。它的目的在于决定不同的基因在染色体上的位置。一条染色体是一条独立的DNA链，同一条染色体上的基因在该染色体上呈线性排列。人类的20000-25000个基因分布在24种染色体上，它们在染色体上的位置可通过两种制图方法来表示：1、物理图谱(physicalmap)，即确定基因之间的绝对物理学距离，通常用Mb(百万碱基对)或Kb(千碱基对)来表示2、遗传图谱(geneticmap)，即确定基因之间的遗传学距离，用cM(centimorgen分摩)表示。广泛定

2、义基因克隆：基因克隆通常涉及到将构成某一基因的基因组DNA(genomicDNA，gDNA)或互补DNA(complemantaryDNA,cDNA)插入某一载体内，利用载体在宿主细胞(通常用大肠杆菌)中大量繁殖而获得该基因的足够量的拷贝，以便于进行基因的结构和功能的分析，广义的基因克隆也包括任何使基因或DNA片段扩增的操作。医学遗传学讨论的基因定位与克隆实质上不是广泛意义上的基因定位与克隆，主要针对致病基因的鉴定，即将某一特定基因的突变与某一特定的疾病联系起来，确定基因突变与某一疾病之间的因果关系，了解其致病机理，为疾病的诊断、预防和治疗提供理论依据。基因定位方法strategyfor

3、genemapping染色体多态法（chromosomeheteromorphism）染色体畸变法(chromosomeabnormality)体细胞杂种法(somaticcellhybrids)染色体分类法(chromosomesorting)原位杂交法（FISH）剂量分析法(dosageananlysis)测序法（sequencing）家系分析法（pedigreeananlysis）染色体多态法.主要限于性染色体上的定位，根据某些性状或疾病在男女性别间的差异，结合系谱分析，将这些基因定位在X染色体上。Duffy血型基因定位于1号染色体上(Donahue在做染色体实验时发现自己的1号染

4、色体长臂在靠近着丝粒区的地方变长了，通过对他自己家族成员染色体的观察发现，这一异常是遗传的，将其作为1号染色体上的一个特定的标记，随后发现这一标记与Duffy血型具有平行性，表明这种染色体的异常结构同这一基因相连锁，因此将此血型基因定位于1号染色体上。)染色体畸变法畸变常涉及两个位点，如果这两个位点之一正好是某一功能基因所在的位置，染色体的畸变则肯破坏该基因的正常功能而引起疾病，根据染色体畸变的位置和疾病发生的关系，则可将致病基因定位于染色体的某一特定位置上。NLMG染色体异常进行基因定位---睾丸决定因子Testisdeterminingfactor体细胞杂种法体细胞杂种通常由人和鼠的

5、体细胞融合而成。这些融合细胞在最初几代培养过程中具有选择性丢失人类染色体趋势，而保留所有的鼠染色体。保留在融合细胞中的染色体可以是多条，也可能只有一条甚至某条染色体的一部分。根据研究的需要可将含有不同人类染色体的人鼠杂种细胞组合成人鼠杂种细胞板(hybridpanel)，结合杂种细胞板和PCR的方法或基因剂量分析，或蛋白质表达分析，可将相应的基因定位到特定的染色体或染色体片段上，该杂种细胞板在人类基因定位以及人类基因组计划中发挥过重要的作用。体细胞杂交基因定位示意图Miller等运用体细胞杂交证明胸苷激酶（TK）位于人的17号染色体，这是首例应用体细胞杂交法进行的基因定位。原位杂交法（F

6、ISH）如果一个基因或基因的某一部分已经被克隆，则可将该基因用同位素或荧光标记和染色体原位的分子杂交，在染色体上恒定出现信号的区域即该基因在染色体上的位置。同一染色体上的多个不同的基因可用不同的荧光标记来鉴别他们在染色体上的相对位置，运用这一方法在中期染色体上，可区分两个相隔约2Mb的基因；在间期染色体上，据称可鉴别仅相隔50kb的两个基因。CONNEXIN31.1候选克隆：根据基因的功能、结构及已有的研究发现，预测可能与目的新基因有关的疾病，然后在相应患者中检测该基因的突变情况。位置克隆：目前最常用的方法，将某一疾病的致病基因用连锁分析的方法定位在某一染色体的特定位置上或区域内，然后在

7、该位置上或区域内鉴定其致病基因。连锁分析原理生殖细胞在减数分裂时发生交换，一对同源染色体上存在着两两相邻的基因座位，若两者之间距离较远，发生交换的机会较多，则出现重组次数就多；若两者之间距离较近，则重组机会较少。连锁分析就是根据基因在染色体上呈线性排列，不同基因相互连锁成连锁群的原理，即应用被定位的基因与同一染色体上另一基因或遗传标记相连锁的特点进行定位。123基因分型Genotyping除性染色体外，每个人体内的染色体都有两份。一