[精品]纯度鉴定

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1、茶叶多糖纯度鉴定及结构分析的研究进展1茶叶多糖的纯度鉴定和相对分子量的测定1.1茶叶多糖的纯度鉴定多糖类复合物等主物人分子的理化性质、生物活性与具相对分子质量有很人关系，因此，在多糖类复合物的研究及其产站质量控制中，相对分子质量是一个重要指标。要测定多糖类复合物的相对分子质虽，首先要求鉴定其纯度，但是与小分了化合物的判断标准不同，茶叶多糖是高分子化合物，它的纯品实质上是一定相对分子质最范用的相对均一组分，只代表相似链长的平均分布。目前，国内外多糖类复合物纯度的鉴定方法主要有：比旋度法、超离心法、电泳法和凝胶色谱法。一

2、般來说，纯度必须经过两种方法以上鉴定，结果才能肯定。这几种方法的主要应用如表1所示。«1合需饨度鉴定各方法的原理和应用Table1TheprtndpieandmethodoftheidentincationofpolyMccharide方法Method原理Principle应用Application比施度法Specificopticalrotationmeasurement超离心法Ultracenthfu^almethod电泳法Electrophoreaia凝胶色谱法HPLCIt的结构具有直光性.比旋度的值不改变则为

3、纯品相同大小的分子具有相同的相对分子质董•在离心力场中所受育心力相1可的原理.分鳶均一的分子廉据・分子的大小所帯电荷数和形状不同•在电场的作用下莊GS体胶上迁移車不同•与第标样的迁移率相比较而确定分子■不同•在凝胶柱中移动速度不同•流出液经示差检测仪检側.如只有一个对称的峰.則表明为均一成分受溶液的31度、玻度特别是微■成分的改变而形响较大•受限不能完全将洛液中相对分子质■不同的分子分开•使用具有简限性较常用快速、离分績和晝现性好的优点闻此最为常用在大多数文献中，茶叶多糖的纯度鉴定一燉都是采用高效凝胶液相色谱和示差检

4、测器检测的方法。也有利用茶叶多糖蛋白在280nm处有吸收，通过紫外检测器来检测茶叶多糖的纯度。红毛菜多糖的分离纯化及纯度鉴定2.4纯度鉴定2.4.1紫外光谱鉴定将洗脱的多糖用Du640蛋白核酸分析仪（美国贝克曼库尔特公司）在190-450nm范围的测定其紫外光谱2.4.2多糖的纸色谱在滤纸上距底端1cm处以PY1PY21的水溶液点样，展开剂为正丁醇、浓氨水、水的混合物40:50：5混合后放置2小时以上。室温展开6小时取出后吹干置于碘蒸汽中吸附约14小吋后观察其结果2.4.3红外光谱测定将过柱后的糖旋转蒸干后取l-2m

5、g用KBi•压片川NicoletAVATARFT-IR360型红外光谱仪测定红外光谱。3结果与讨论3.3纯度的鉴定331紫外光谱洗脱后组分的紫外光谱如图34所示PY1和PY2只有在190nm有最大吸收在280nm吸收很小说明蛋白质的含量很少且没有别的杂峰说明杂质含罐较少。从PY1PY2的红外光谱图如图56可以看ill在34002800cm'14001200cm，处有多糖的特征性吸收峰存在此外述有一些特殊基团吸收峰1076cm"和930cm'1处的峰提示3,6内储桥的存在表明此多糖中含有3,6内瞇半乳糖1234cm」

6、处的吸收峰表明该多糖含有硫酸基且并无杂峰存在说明都是单一组分图3组分PY1紫外光谱图4组分PY2紫外光谱图5PY1组分红外扫描■■■■■■•■•■•■■■•••■荔枝多糖分离纯化及纯度鉴定荔枝多糖纯度鉴定：经scphadcxG-25层析柱分级纯化后用以下3种方法分別对A2组分的多糊进行纯度鉴定聚丙烯酰胺凝胶柱P-100鉴定:柱参数：柱体积：直径0.4cm*100cm;柱床体积:直径0.4*60cm;T衡流速:0.1mlmin,洗脱液为0.2molL氯化钠溶液与醋酸的混合液.从具洗脱图谱图⑶可知，为一个单峰，说明A

7、2具有较高纯度.（管数）聚内烯酰胺凝胶电泳鉴左:缓冲液pH=8.9的为硼砂-KOH缓冲液显色剂80%为硫酸和20%乙醇混合液对A2进行电泳，电泳吋间3h,结果如图4所示为单一色斑,说明所得多糖A2为纯品醋酸纤维薄膜电泳鉴定:缓冲液为pH=9.2的硼砂・KOH缓冲液显色剂为碘■氯仿，电泳时间为lh电泳后的色带为一斑点,说明所得多糖A2为单一成分.乳酸菌胞外多糖的研究2.3EPs的纯度鉴定多糊的纯度只代表相似链长的多糊分子的平均分布。通常所谓的多糖纯品实际上是一定分子量范围的多糖的均一组分。目前常用于多糖纯度鉴定的方法有

8、凝胶层析法、高压电泳法、超速离心法、旋光测定法和毛细管电泳法等。多糖纯度鉴定中应用最多的是凝胶层析法。凝胶层析得到一对称洗脱峰，则证明该多糖是均一组分，它的优点是准确度高。高压电泳法电泳结果显色后，如皇单一色斑，则表示该活性多糖为均一组分。高压电泳法鉴定多糖纯度早期用的较多，现在大多不再使用，原因是灵敏度不高。超速离心法是将多糖溶液进行密度梯度