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时间：2019-10-28
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1、PCR引物设计软件 primerPremier5.0 应用简介温州医学院附属第一医院检验科陶志华一.引物设计的基本原则引物长度（primerlength）产物长度（productlength）序列Tm值(meltingtemperature)ΔG值(internalstability)引物二聚体及发夹结构（duplexformationandhairpin）错误引发位点（falseprimingsite）引物及产物GC含量（composition）1.引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，即Ta
2、q酶的最适温度2.引物3’端的序列引物3’端的碱基一般不用A，因为A在错误引发位点的引发效率相对比较高引物间3’端的互补、二聚体或发夹结构也可能导致PCR反应失败3.引物的GC含量一般为40-60%，过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。4.引物所对应模板序列的Tm值最好在72℃左右5.ΔG值(自由能)，反映了引物与模板结合的强弱程度。一般情况下，引物的ΔG值最好呈正弦曲线形状，即5’端和中间ΔG值较高，而3’端ΔG值相对较低6.引物二聚体及发夹结构的能量一般不要超过4.5，否则容易产生引物二聚体带而且会降低引物浓度从而导致PCR正常反应不
3、能进行二.PrimerPremier5.0 引物设计软件简介PrimerPremier5.0用途：引物分析评价功能；引物的自动搜索功能Premier的主要功能：
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