病毒感染诊断、治疗和预防

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1、第二十六章病毒感染的诊断？检测病毒颗粒？检测病毒成分（抗原、核酸）？检测病毒抗体1第一节病毒的分离培养2一、标本的采集1、采集时间：用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本，应采集病人急性期标本。血清学检查的标本最好取双份。2、标本种类：根据不同病毒感染采集不同部位标本（如鼻咽拭子、脑脊液、血液、粪便或疱疹液）。3二、标本的处理和运送1、标本运送：应立即送检，运送标本中注意冷藏。保存于含抗生素的运送液中。不能立即送检时应存放于・70°C低温冰箱或液氮内保存。2、标本处理：有杂菌标本应用高浓度抗生素处理（4°C）并离心。4三、分离培养细胞培养动物接种鸡胚接种5（一）细胞培养是

2、从机体中取出组织或细胞，模拟机体内的生理条件在体外进行培养，使之生存和生长。6倒置显微镜观察细胞7细胞培养的优点：?来源方便，容易选择易感细胞。？无免疫力，利于病毒生长。？培养条件易于控制：可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分。？接种量大：细胞可以大量生产，而且还可较久地持续培养。动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制。？加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速，早出结果。81、细胞类型？原代细胞动物或人组织直接用蛋门酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长。（人胚帅细胞，鸡胚细胞、猴肾细胞、兔肾细胞等）9?二倍体细胞在体

3、外连续培养50〜60代仍保持其二倍染色体数目的细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。？传代细胞能在体外连续传代，來自肿瘤细胞或发生口发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。10优点原代细胞多种V敏感缺点來源困难用途分离二倍体细胞多种V敏感來源易,50代？诊断/疫苗制备传代细胞无限传代，来源易致瘤性分离/鉴定/研究V112、病毒在细胞内增殖的指征(1)细胞的变化？细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)：病毒在细胞内增殖后，可引起细胞形态学改变，如细胞肿胀、变圆、皱缩、融合或细胞聚集成葡萄串状，甚至细胞溶解或脱落等，这种可在普通光镜下看到的出病毒增殖引起的细胞形

4、态变化，称为CPE。12细胞病变效应(CPE)1314?包涵体(inclusionbody)形成定义：有些病毒感染细胞，在普通显微镜卜FJ见胞浆或胞核内出现嗜酸性或嗜碱性，圆形、椭圆形或不规则形的斑块结构，称为包涵体。反应物。本质：病毒颗粒聚集体、病毒增殖留下的痕迹、病毒感染引起的细胞15意义：不同的病毒形成的包涵体特征(人小、形态、嗜性等)各界，故可作为诊断依据。如狂犬病病毒在脑组织细胞内形成的胞浆内嗜酸性的内基小体(Negribody),可辅助诊断狂犬病。16包涵体17包涵体形成18细胞。(2)红细胞吸附现象某些病毒感染的宿主细胞能吸附脊椎动物的红(3)干扰现象19

5、(-)动物接种最早的病毒培养方法；根据病毒种类不同，选择嬪感动物及适宜接种部位。20（三）鸡胚培养21222324传代培25流感病毒分离培养的最好方法是鸡胚接种：初次分离一一羊膜腔，养一一丿求囊腔，然后取羊水或丿求囊液做血凝和血凝抑制试验鉴定。?初步鉴定一血凝试验：羊水/丿求囊液+鸡RBC红细胞凝集表明可能有病毒存在和増殖。？确证一血凝抑制试验：已知流感病毒抗体+羊水/球囊液+鸡RBC无凝集流感病毒增殖凝集非流感病毒增殖26正常鸡红细胞凝集红细胞27沉积凝集28四、病毒的鉴定1、病毒种类与型别鉴定？初步鉴定：动物感染范围及潜伏期、对鸡胚的皱感性、细胞形态变化类型、红细胞

6、吸附、病毒干扰现象、血凝性质、理化性质（核酸类型测定、大小形态、乙醸敏感试验、耐酸试验）等。？最后鉴定：主要是血清学方法（中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、IFA和ELISA等）和分子生物学方法。292、病毒感染性测定？50%组织培养感染量(50%tissuecultureinfectivedose,TCID50):引起半数培养细胞发生病变(CPE)的病毒量。？蚀斑形成单位(plaqueformingunit,PFU):在细胞培养表面覆盖一层半固体物质使细胞病变形成蚀斑。30病毒标本（充分稀释）

7、单层细胞137°C,60min,吸附洗涤覆盖琼脂J37°C,3〜5d观

8、察蚀斑（中性红/结晶紫染色）PFU/ml：定量测定病毒感染性如轮五、形态学检查1、光学显微镜检查：检查包涵体2、电子显微镜检查:状病离、冠状病毒等32轮状病毒33?酶免疫第二节检测病毒抗原？免疫荧光检测(IFA)?放射免疫测定(RIA)技术(EIA)等34第三节检测病毒抗体1、中和试验：中和试验是指病毒在活体内或细胞培养中被特界性抗体中和而失去感染性的一种试验。可用來检查患病后或人工免疫后机体血清中抗体的增长情况，也可用來鉴定病毒或研究其抗原结构。中和抗休特异性高，维持时间较长，因此流行病学常用此法。352.血凝抑制试验：许多病毒能凝集鸡