对山东地区TTV基因片段的检测及其部分核酸序列测定（医学论文）

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1、对山东地区TTV基因片段的检测及其部分核酸序列测定作者：于建国商庆华任浩肖德明尹燕明白薇戚中田张光曙【关键词】输血传播关键词：输血传播，病毒;肝炎，非甲〜戊型;核酸，序列摘要:目的了解山东地区输血传播病毒(TTV)分离株感染状况及基因变异的情况.方法应用逆转录一聚合酶链反应法(RT-PCR)检测山东地区26例非甲〜戊型肝炎和12例肝细胞癌患者血清中的TTVDNA,对阳性扩增的产物进行测序，并分析其基因变异情况.结果26例非甲〜戊型肝炎患者检出TTVDNA阳性者11例(42%).对其中2例(TTVSD4,TTVSD5)进行PCR产物直接测

2、序，并与日本株(AB008394)相比较，其核昔酸序列同源性分别为99.9%和100%•而12例肝细胞癌患者中TTVDNA阳性3例(25%),对其中1例(TTVSD6)测序，与日本株(AB008394)相比较，其核昔酸序列同源性为99%;TTVSD4、TTVSD5和TTVSD6之间的核苛酸同源性均为99%.结论山东地区非甲〜戊型肝炎和肝细胞癌患者中TTV感染率较高，测序结果表明其与日本株(AB008394)有较高的同源性.Keywords:transfusiontransmittedvirus;nonA-Ehepatitis;Nucle

3、otidesequenceAbstract:AIMToinvestigatetheprevalenceofTTVinfec-tionandgeneticvariationofTTVisolateinShandongProvince.METHODSTTVDNAwereamplifiedandde-tectedbyRT-PCRmethodsfromseraofpatientswithnonA-Ehepatitis(n=26)andhepatocellularcarcinoma(n=12)・ThepositivePCRproductswere

4、sequencedandanalyzedforgeneticvariation.RESULTSTTVDNAweredetectableinilof26patients(42.3%)withnonA-Ehepatitis.Twoofthem(TTVSD4,TTVSD5)weresequencedandcomparedwithknownsequenceofTTVisolatesinJapan(AB008394)・Thenucleotidehomologywas99%and100%.TTVDNAwaspositivein3ofl2patien

5、ts(25%)withhepatocellularcarcinoma.Oneofthem(TTVSD6)wassequencedandcom-paredwithAB008394.Thenucleotidehomologywas99%.CONCLUSIONTTVinfectionishighinthenonA-Ehepati-tisandhepatocellularcarcinomapatientsinShandongprovince.ThesecquenceresultsshowedthattheTTVisolateinShandong

6、provincehashighhomologywithTTVisolateAB008394inJapan.以往研究认为，TTV感染具有致病性，同输血或血制品密切相关，可能是导致肝功能长期损害的又一致病因子•为探讨山东地区非甲〜庚肝炎和肝癌患者TTV感染状况和基因变异的情况，并阐明TTV在人类肝炎中的作用、地位及其传播途径，我们检测了非甲〜戊型肝炎和肝癌患者血清中TTV的感染率，并对其中3例TTV阳性患者进行序列分析.1对象和方法1.1对象1998-03/2000-09解放军第88医院、济南军区肝病研究所、泰安市中心医院和泰山医学院附属医

7、院临床与病理确诊为非甲〜庚肝炎患者26(男19,女7)例，平均年龄(37±1.4)岁•患者有输血或输血制品、手术、拔牙、针灸、注射以及与肝炎患者密切接触史者17例•这些非甲〜戊型肝炎排除甲〜庚型肝病毒、EEV、CMV感染•肝癌患者12(男8,女4)例，平均年龄(34±8.8)岁•其中有输血或输血制品、手术、拔牙、静脉注射史者10例•临床排除甲〜庚型肝炎病毒、EEV、CMV感染•空腹抽血5mL,分离血清，分装后置-80匸冰柜保存备用，采血同吋进行流行病学调查.1.2.1TTVDNA提取取血清IOOmL力口300此裂解液[13.3mmolL

8、-lTris-HCL,pH8.0,6.7mmolL-l乙二胺四乙酸(EDTA),6.7gL-l十二烷基硫酸钠(SDS),133mgL-l蛋白酶K],70°C水浴lh,酚/氯仿抽提，无水乙醇沉淀，溶于20pL