ttv核酸模板快速制备方法

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1、TTV核酸模板快速制备方法作者：苏明权，冯继红，于文彬，徐光华，马越云，张建芳，张林，刘家云【关键词】TT病毒　　关键词:TT病毒;聚合酶链反应;核酸制备　　摘要:目的寻求建立适合大批量临床标本检测TT病毒（TTV）核酸快速制备方法，直接用于PCR扩增.方法应用蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法，分别制备TTV核酸做PCR模板，用于TTV的聚合酶链反应的快速检测.结果在30例非甲～非庚型肝炎血清和50例慢性乙型肝炎患者血清，应用经典的蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法，分别制备TTV核酸模板，在相同条件下进行PCR扩增，结果

2、两种制备方法的符合率为89%.结论TTV是一种新发现的肝炎病毒，目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据，建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中TTV核酸制备方法，对TTV肝炎的快速诊断，具有重要的意义.RapidpreparationoftransfusiontransmittedvirusnuclEicacidtemplateSUMing-Quan1，FENGJi-Hong2，YUAYue-Yun1，ZHANGJian-Fang1，ZHANGLin1，LIUJia-Yun11CenterofClinicalMolecular

3、Biology，XijingHospi-tal，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi'an710033，China，2DeparmentofInfectiousDiseases，CollegeofMedicine，Yan'anUniversity，Yan'an716000　　Keyittedvirus;polymerasechainreaction;DNApreparation　　Abstract:AIMToestablishamethodadaptingtorapidpreparationofTTVDN

4、AfrombulksamplesforPCR.METHODSTTVnuclEIcacidtemplateethods，viz.hydroxybenzenechloro-formextractionanddirectlyrapidcracking.RESULTSDNAabstractedbythetethodsplifiedatsamePCRparameterandthecoincidencerateainlaboratorydiagnosismethodistodetectit'sDNAbyPCR，soitisveryimportant

5、toestablishamethodforrapidpreparationofTTVDNAfrombulksamples.　　0引言　　TT病毒是近年新发现的一种肝炎病毒，当发现一种新的病原性相关病毒因子时，建立一种敏感、快速、特异的实验室检测方法并评价该病毒因子在肝病中的价值是十分重要的，该方法的临床适用性和可行性，是评价所建立方法在临床上应用价值的关键所在.目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据，建立具有快速、简便、适合大批量临床标本中TTV核酸制备方法，对TTV肝炎的快速诊断，具有重要的意义.我们从临床快速检测需要为目的，寻

6、求建立一种快速、简便的TTV核酸制备方法，用于大批量临床标本的检测，获得满意的结果.　　1材料和方法　　1.1材料　　非甲～非庚型肝炎血清30例，来自延安大学医学院传染科;慢性乙型肝炎患者血清50例，来自西京医院就诊患者;引物及合成:根据Nishizamol・L-1Tris-HClpH8.0，200mmol・L-1NaCl，10mmol・L-1EDTA，20g・L-1SDS，1g・L-1蛋白酶K），60℃水浴60min，加等体积酚:氯仿:异戊醇（25∶24∶1）混匀，

7、4℃冰浴下30min，2000g离心10min，取上清加等体积预冷无水乙醇-20℃过夜，1000g离心20min，沉淀溶于20μL0.1×TE缓冲液中，备用.②直接快速制备法:20μL血清加50μL快速裂解液（50mmol・L-1TrisHCl，pH8.0，50mmol・L1KCl，1.5mmol・L-1MgCl，10g・L-1NP-40，5g・L-1Tin，1000g离心10min，取上清做模板.③PCR扩增:第1轮PCR扩增:总反应体积为25μL，包括:10×PC

8、R缓冲液2.5μL;4×dNTP2.0μL;外引物各1.0μL（50pmol・L-1）;DNA模板5.0μL;TaqDNA酶3U・μL-1;无菌蒸馏水12.5μL;无菌石蜡油30