简述核酸疫苗制备过程

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1、简述核酸疫苗制备过程核酸疫苗乂称基因疫苗，是指将编码某种抗原蛋a的外源直接导入动物细胞，在宿主细胞屮表达并合成抗原蛋白，并激起机体一系列类似于疫苗接种的免疫应答•，起到预防和治疗疾病的0的。自1990年Wolff等人意外发现核酸疫苗盾，其相关的研究得到了广泛的重视，并得以迅速发展，誉为“第三次疫苗革命”。本文就核酸疫苗的构建、特性、免疫机制、接种方式、影响因素、研究现状和前景作一综述。核酸疫苗是由编码病原体抗原的基因和作为真核细胞表达载体的质粒DNA组成。病原体抗原的编码基因可以是一组相关基因或单一病原体免疫保护性抗原基因，也可以是编码抗原决定

2、簇的一段DNA序列，其表达产物应是病原体的有效成分，可以引发保护性免疫。用于构建核酸疫苗的载体质粒多以pUC或pBR322质粒为基本骨架，主要包括启动子、増强子和3’端多聚A。巨细胞病毒（CMV）启动了和ROUS肉瘤病毒（RSV）的启动子都可在哺乳类细胞内表达。另外也有人采用来自哺乳动物和禽类的启动子。Fynan等1993年将编码流感病毒血凝素H或H7的CDNA片段插入CMV质粒的转录调控元件的下游，构建了抗流感病毒的核酸疫苗，另外，乙型肝炎病毒、人免疫缺陷综合症病毒、脑膜炎病毒等基因均被成功地克隆到含CMV启动子的真核表达载体上，并表现了免疫

3、活性。用丁*构建核酸疫苗的病毒载体包括流感病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关载体、脊髓灰质炎病毒等。1994年Castrucci-MR[6]把可以引起保护性免疫反应的致死性淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）的表位基因片段克隆到流感病毒（H1N1）的基冈组屮制备核酸疫苗，免疫小鼠后，可使小鼠抵抗致死性淋巴细胞脉络从脑膜炎病毒的攻击，其免疫效果可维持4个；J以上。二核酸疫苗的特点与传统的灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗和比，核酸疫苗具有如下特点:（1）免疫效果好，基因疫苗能在宿主细胞屮产生外源性蛋白，此种蛋白比原核生物表达系统中产生的蛋白更象天然分

4、子，其抗原识别递呈过程与自然感染十分相似，从而引起几乎等同于感染这些病原体或弱毒疫苗免疫肜所产生的免疫极答，并且避免了基因重组技术在体外合成的蛋白质抗原表位丢失或改变。（2）利用一种表达载体同时表达多种蛋a，诱导机体产生针对多种病原体的免疫应答，从而起到一次注射核酸疫苗同吋预防和治疗多种疾病的效果，并可抵抗某些变异病原体的侵袭（3）核酸疫苗接种后，蛋內质抗原在宿主细胞可直接与MHCI类和MHCII类分了结合，引起广泛的细胞免疫和体液免疫，但无毒力返祖的危险（4）安全性好，由于核酸疫苘一般采用表达载体在动物细胞体内进行抗原表达，不与宿主染色体DN

5、A整合，但能在宿主体内表达，与病毒活疫苗和比，避免Y病毒木身存在的复毒和病毒基冈组整合到宿主染色体的危险（5）核酸疫茁具冇共同的理化特性，可在同一载体上构建表达多种抗原，生产多价疫苗或同时注射2种以上的核酸疫苗來进行联合免疫（6）制备简单，利用成熟的基因重组技术，将克隆的目的基因DNA直接接种，避免了表达载体的构建，表达产物的提取等繁琐过程（7）由于核酸疫苗作为重组质粒，能在工程菌内快速大量增殖，且提取方法简便，可使生产成木降低，并能加工干燥，便于储藏和运输。三核酸疫苗免疫机理对核酸疫苗免疫机理说法不一，大多数学者认为，其致病机理在于他模拟了病

6、毒的自然感染过程。DNA质粒在注射部位被肌细胞吸收摄取后，通过所含的启动子和增强子系统调节合成所编码的蛋內质，合成的蛋白质被细胞内蛋白酶复合体降解成含病毒抗原表位的肽段，进入内质网与合成MHCI类分子结合，然后被转运系统递呈到细胞膜表而，此复合体共同激活CD8+CTL,部分被分泌或释放入血的蛋ITJ质，激活特异性B细胞，从而产生保护性抗体；另外，分泌的蛋白质被巨噬细胞或树突状细胞等专职抗原递呈细胞俘获，被加工成肽段，进入溶酶体/內体区与MHCII类分子结合，激活受MHCII类分子限制的CD4+Th细胞，被激活的Th细胞分泌IFN—Y、IL-2等

7、细胞因子，，进一步促进和强化体液免疫和细胞免疫。另外，试验证明质粒上的氨苄青霉素抗性选择基因屮的文结构5’-AACGTT-3,能够使单核细胞产生0细胞介素-12,刺激细胞分泌干扰素，增强NK细胞的活性，称为“单链免疫刺激DNA序列”起到佐剂的作用。!1!核酸疫苗可以通过多种方式、途径接种到机体的适当部位，不同的接种方式或途径可影响其免疫效果。接种途径依启动子的来源而有所区别，用动物病毒和一般哺乳动物扁动子构建的DNA疫苗一般用生理盐水稀释质粒DNA肌肉注射法，如股四头肌和腓肠肌等骨骼肌凶为其特殊结构如肌浆网、横旳微管系统，适合于摄取和表达DNA

8、,兼之其注射方便，因而常被选为接种组织，也可选择肌肉皮下、腹腔内、静脉内接种。血用来自乳腺的乳清酸蛋白(WAP)启动子构建的疫苗在乳腺和皮下脂肪接种效