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1、放射免疫分析技术摘要RIA是一种微量分析法，就是利用放射性核素标记抗原或抗体，然后少被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。它兼有放射性同位素的灵敏性和抗原、抗体反应的特显性两大特点。该法还具有准确性高和精密度好，便于标准化以及操作简便、经济等优点。由于RIA具有灵敏度高，特异性强，测量简单，成本低等优点，RIA在应用方而具有一定的生命力。但是，又因为它最致命的弱点就是使用放射性核素，此外标记物有效使用时间短，难以实现操作和测量的自动化等，它的进一步发展受到一些局限。现在免疫分析技术都在朝着非同位素标记免疫分析的方向发展，自动化仪器已经投入到临床常规项目的检测中，使得传统
2、的RIA使用市场逐渐缩小。不过第五代RIA技术的出现，使得现在的RIA技术较其他方法在方法学冇了更多的优势，尤其是纳米磁性固相的应川，为RIA向动化的研制提供了很人帮助。此外，在生命科学的实验领域，非放射标记免疫技术始终不能代替RIAo关键字RIAIRIA基本原理第五代RIA技术1959年，美国科学家Berson和Yalow将放射性同位素测量的高灵敏度与抗原抗体的高特异性巧妙地结合起來，创立了放射免疫分析(radioimmuoassay,RIA)技术。RIA经过半个多世纪的发展，可以分析成百上千种物质，包括激素、维生素、肿瘤相关抗原、抗体、药物、病毒等。使那些曾认为无法检测的微量而又具有亜要
3、牛物活性的物质得以精确定量，为医学、牛命科学的发展做出划时代的贡献。因此，1977年Yalow荣获诺贝尔牛理学或医学奖。随后，各国学者发展了酶免疫分析(EIA)、荧光(FIA)、时间分辨荧光(TRFIA)和化学发光(CLIA)等非同位索标记免疫分析技术。1.RIA基本原理放射免疫分析法的本质是一种分子相同的被侧物质和同位素标记物质，同另一种浓度有限的特异性结合试剂进行的竞争性结合。当同位素标记化合物和特异性结合试剂的量保持一定时，加入的被侧物或标准物的量与标记物的量Z和多于特异性结合试剂有效结合的数目时，被测物或标准物与标记物一•特界性结合试剂复合物之间就呈现i种函数关系。即被测物的量越多，
4、则标记物的被稀释程度也就越大，使标记物一特异性结合试剂复合物的量逐渐减少，放射性强度侧定就越低。根据这种原理来对生物体内的微暈物质进行定暈测定。以标记化合物为P*.,非标记化合物为P,特异性结合试剂为Q其反应式构成了放射免疫分析法的理论基础（图1）。P・+Q图】.放射免疫分析法的基本反应为了进一步阐明放射免疫分析法的原理，我们再用图2名加以说明。图2为我们提供简单的量的概念，图名中黑圆点代表标记抗原，空白圆点代表非标记抗原，双凹型符号代表抗体，A、B、C、D分别代表四种不同浓度的非标记抗原。基于标记抗原和非标记抗原的理化性质相同，与抗体典冇相同的结合力,所以随着非标记抗原含量的增加，标记抗原
5、和抗体相结合的能力所受到的竞争抑制就越大,因而B/F或B/B+F的比值相应愈小，呈相反的关系。b/f抗原抗体ZZTB结合如离昵原抗原(L6TBs?1<0D.33ooo00”DOO"oo”oooo口«ZD+口Tg0.250J7图2放射免疫分析原理示意图因为标记抗原对抗体的结合被未标记抗原的竞争结合所抑制，丁是产牛-•条抑制曲线（图3）。它反映了标记伉原的结合度、或游离度、或结合度打游离度Z比和未标记抗原的函数关系，这种关系可以有规律的表现在放射免疫测定的剂暈反应曲线上。这条曲线就是对样品进行定量的基础。°J®10抗原浓度竞争抑制曲线示意图简单來说,放射免疫分析的原理：就是利川放射性核索标记抗原
6、或抗体，然后与被测的抗体或抗原结合，形成抗原抗体复介物的原理来进行分析的。它乂分为两种方法。1.1竞争性RIA,又称传统RIA主要特点：标记的是抗原。其原理：未知抗原Ag+,标记抗原Ag*+,己知定量抗体Ab,标记抗原与抗体复合物Ag*Ab+,未知抗原与抗体复合物AgAb+,游离标记抗原（去除）（未知抗原多，标记抗原与定量抗体结合的复合物就少，表现为负相关）。临床上甲胎蛋白（AFP）,癌胚抗原（CEA）,P2-微球蛋A（P2-MG）,铁蛋A（Fer）,人绒毛膜促性腺激素B亚单•位（HCG■卩）等的检测都是丸争性RIA法原理。竞争性RIA法，根据加样顺序与温冇次数的区别，反应方式分三种：平衡法
7、，将非标记抗原（被测物■标准品）、抗体、标记抗原依次加入反应篦混匀后一次性温冇至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B（复合物）与F（游离物）如：AFP,P2-MG,Fer;顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品），与抗体在反应管内作第一次温育,待反应达到动态平衡后。加入标记抗原，再作第二次温育后，分离B与F如:CEA;急诊检测法：为临床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA反应达到动态平衡就终止反应；分离
