放射免疫分析课件

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1、放射免疫分析第1讲放射免疫分析的概念和产生放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)是最早的一种标记免疫分析，通过放射性示踪物观察抗原与抗体的结合反应产物测定微量物质。1952年I.A.Mirsky提出老年性糖尿病可能不是因为胰岛素分泌不足引起的，而是由于肝胰岛素酶降解胰岛素的速度加快引起的。为了验证这种观点，S.A.Berson和R.S.Yalow等人(1956)给非糖尿病和糖尿病受试者静脉注射131I标记胰岛素以研究其代谢，他们比较了接受胰岛素治疗的病人和从未接受过胰岛素的受试者的血浆，发现前者胰岛素的消失速度比后者慢得多，提出外源胰岛素的注射使病人体内产生了抗体，

2、与抗体的结合导致胰岛素消失速度降低。R.S.YalowS.A.Berson由于胰岛素抗体的浓度太低，用以往的免疫学技术不能测定，因此Berson和Yalow等人采用放射性标记法测定浓度极低的抗原-抗体复合物。电泳结果表明在接受胰岛素治疗的病人的血浆中，胰岛素与一种球蛋白结合，证明胰岛素抗体确实存在。值得一提的是，在20世纪50年代中期，免疫学家还不能接受“胰岛素抗体”这一概念。Berson和Yalow等人的论文被《Science》退稿，刚开始投《JournalofClinicalInvestigation》(JCI)也是退稿，后来向JCI的编辑作出妥协，从标题中删去“胰岛素抗体”字样，

3、论文才得以在JCI上发表。Berson和Yalow等人的工作引发了免疫学上的一场革命。现在普遍认为一些小分子量的多肽如后叶加压素和后叶催产素也可以是抗原。在方法上，Berson和Yalow等人提出：当抗体已定量时，标记胰岛素和抗体的结合与非标记胰岛素的浓度成函数关系，这就为血浆胰岛素的放射免疫分析提供了基础。在随后的几年中，他们又做了一些研究工作，包括胰岛素与其抗体反应的定量和可得抗血清的物种特异性等，这些必要的工作使放射免疫分析由理论转变为实践，于1959年首次完成人血浆(不进行抽提)胰岛素的测定。RIA具有技术简易、价格便宜、特异性强和灵敏度高等优点，广泛用于生物医学研究和临床诊断

4、。到20世纪60年代晚期，RIA已成为一项重要的分析技术。据估计，在1975年的一年之中，全美进行RIA的临床实验室有4000个以上。Yalow因此荣获1977年Nobel生理学或医学奖(遗憾的是，Berson于1972年因心脏病逝世，未能共享殊荣)。第2讲放射免疫分析的原理和特点当抗体初始浓度[Ab0]低于标记抗原初始浓度[Ag*0]和非标记抗原初始浓度[Ag0]之和时，非标记抗原Ag将与标记抗原Ag*竞争结合抗体Ab，分别生成非标记抗原-抗体复合物Ag-Ab和标记抗原-抗体复合物Ag*-Ab。Ag*+AbAg*-Ab+AgAg-Ab当[Ab0]和[Ag*0]都已确定时，如果[Ag

5、0]低，则生成的Ag*-Ab多(其浓度B高)，剩余的标记抗原Ag*少(其浓度F低)，B/F值较高；相反，如果[Ag0]高，则B低，F高，B/F值较低。在测定时，[Ab0]和[Ag*0]都是已知的。以B/F值为纵坐标，以标准溶液非标记抗原初始浓度为横坐标制作标准曲线，得到回归方程，在相同条件下测定未知非标记抗原的B/F值，即可用回归方程求得未知非标记抗原的初始浓度。0[Ag0]B/F标准曲线根据加样顺序与温育次数的不同，放射免疫分析可分为如下三种。平衡法：将非标记抗原、抗体、标记抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂使B与F分离。顺序加样法：先将非标记抗原与抗

6、体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后，加入标记抗原，作第二次温育，然后分离B与F。急诊检测法：为临床上快出结果而提出的反应方式，不等RIA反应达到动态平衡就终止反应。放射免疫分析巧妙地结合了抗体抗原反应的高特异性和放射性核素标记的高灵敏度。RIA的灵敏度极高，可检出0.1pg/ml(0.05pM)的胃泌激素。相比之下，受体位点分析(receptorsiteassay)的最低检出浓度一般至少是RIA的10-100倍。酶标记分析(enzymemarkerassay)由于作为标记的酶分子与抗原共价连接，抗原-抗体反应存在空间阻碍，分析灵敏度的降低几乎不可避免。第3讲放射免疫分析的发

7、展第1代(1959-1964)：Berson和Yalow等人于1959年首次提出了竞争抑制免疫反应原理，创建了RIA技术检测人血浆胰岛素的水平。1960年，Ekins根据RIA相同原理，以某些天然特异性蛋白作结合剂，建立了竞争结合蛋白分析法(CPBA)检测血浆中的甲状腺素、甾体类激素等小分子半抗原。因操作程序比较复杂，难以应用到临床样品的常规检测。第2代(1965-1970)：RIA技术的独特优势受到生物医学研究者的高度关注，许多学者对这一新的