杂色鲍sod、cat和mpeg基因的克隆与分析

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1、集美大学硕士学位论文杂色鲍sod、cat和mpeg基因的克隆与分析姓名：张克烽中请学位级别：硕士专业：水产养殖学指导教师：王艺磊20070622杂色鲍sodcat和mpeg基因的克隆与分析摘要本研究利用KITW术和啦昉法克隆了杂色鲍抗氧化防御系统相关基因sodcat®抗病相关基因mpe殴内参标基因28SrM进而用实时定量P0技术分析了sodca湘mpeg基因在病原菌感染和污染物暴露下的表达谱。结果表明：(1)scxg因组EW长含有介外显子，4f内含子，第一个和第四个内含子遵循规则。so靠因clW列全长984bRSLW/5bRCRI%465bR3’UH送/514bR可编码154

2、t氨基酸。同源性分析表明该序列与其它贝类so靠因具有很高的相似性。进化分析显示，杂色鲍sod基因与其它软体动物sex基因占据进化上独立的分支，而鱼类、哺乳动物各集成一支。定量IW析发现，在副溶血弧菌感染后的第8h24h48附196用寸相，socg因表达水平没有显著差异；在7W露下的第2h12h48附1192用寸相中，只有在12h时相，杂色鲍肝胰腺的s(xg因表达水平显著低于与对照组，其余时相未见变化。(2)获得了2312bpcat基因的cENQ部分片段。杂色鲍感染副溶血弧菌后，肝胰腺中cat基因表达水平在第24h显著低于对照组，在1BT暴露下，肝胰腺中的cat基因表达水平在第

3、2h显著低于对照组。(3)免疫相关基因mpegcENA全长2781bR5’UIR为252bRCPF为2187bR3’UIR为342bp,编码728个氨基酸。同源性分析表明，其与粉鲍、红鲍的mpeg基因具有很高的相似性。进化分析显示，杂色鲍、粉鲍、红鲍在一个分支，而小家鼠、褐家鼠和家牛则在另一个分支，这与生物分类学中的系统分类亲缘关系结果一致。在感染副溶血弧菌后的8h和96h,实验组肝胰腺中的mp碍基因表达水平极显著地高于对照组，在1BT暴露下的第2h12h48h192h四个时相中，杂色鲍肝胰腺的mpeg基因表达水平与对照组相比均未见显著的差异。(切克隆到一个1389bp的28

4、SrRM因片段，为定量RR的分析奠定了基础。关键词：杂色鲍，艮廿爲购犬定量PCR,sod基因，cat基因，mp碍基因，28SrRNA基因Cloningandanalysisofsod,catandmpeggenefromsmallabaloneHaliotisdiversicolorsupertextaAbstractTwogenesbelongingtotheanti-oxidationdefensesystem,superoxidedismutase(sod)andcatalase(cat),onedisease-resistancerelatedgene,macroph

5、ageexpressedprotein(tnpeg)、andahousekeepinggene,28SrRNAhavebeenclonedfromsmallabaloneHaliotisdiversicolorsupertextabyRT-PCRandRACEinthisproject.Real-timePCRwasusedtoanalyzetheexpressionspectrumsofsod.catandmpeggeneunderpathogenchallengeandpollutantexposure.Theresultsshowedthat:(1)Genomicseq

6、uenceofthesodgenecontainsfiveextronsandfourintrons.ThefirstandthefourthintronobeytheGT-AGrule.ThefulllengthofsodcDNAis984bp.Its5'UTRis5bp,ORFis465bp,andthe3'UTRis514bp.ThiscDNAencodesa154aminoacidsprotein.Homologyanalysisindicatedthatthissequenceishighlysimilartoothershellfishsodgenes.Phylo

7、geneticanalysisdemonstratedthatthesodgeneofH.diversicolorsupertextaclusterswithothermollusksodgenes,andoccupiesanindependentlineagedistinctfromthesodgenesinfishandmammals.ReaktimePCRanalysisrevealsthatafterinfectionbyVibroparahaemolyticusfor8hour,24hour,