灭菌方法与生物指示剂

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1、上海汉尼生物技术有限公司李燕燕产品经理灭菌方法与生物指示剂概要灭菌法和生物指示剂生物指示剂的形式无菌保证水平灭菌工艺验证常用灭菌方法制药工业常用的灭菌方法生物指示剂的使用孢子数测定灭菌法和生物指示剂灭菌法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平的方法。生物指示剂系一类特殊的活微生物制品，可用于确认灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。用于灭菌验证中的生物指示剂一般是细菌的孢子。生物指示剂的形式一定数量的孢子附着在惰性载体上，如滤纸条、玻片、不

2、锈钢、塑料制品等孢子悬浮液密封于安瓿中无菌保证水平无菌保证水平一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微生物的概率低至某个可接受水平来表述，即SAL（sterilityassurancelevel）。我国及欧美药典都把SAL不得大于百万分之一作为最终灭菌产品无菌保证的要求，即SAL≤10－6灭菌工艺验证验证一个灭菌工艺系统能否使产品灭菌后达到无菌要求,通常认为灭菌后微生物残存概率小于1×10-6。物理性验证：通过得到的热分布与热穿透数据,来估测一个灭菌程序对微生物的致死性。化学指示剂验证：物品包外用化学指示剂用于验证物品是否经过

3、灭菌处理，物品包内中心部位的化学指示剂才可作为物品是否达到灭菌的参考标志。生物指示剂验证：将已知其耐热性的生物指示剂直接接种在产品溶液或相似溶液中进行验证,是评判灭菌工艺杀灭效果最直观有效的方法,也是灭菌工艺验证必不可少的试验。常用的灭菌方法湿热灭菌法干热灭菌法气体灭菌法辐射灭菌法过滤除菌法不同灭菌方式不同的菌种种类的选择灭菌方法生物指示剂保藏号D值备注湿热灭菌法嗜热脂肪芽孢杆菌BacillusstearothermophilusNCTC10007NCIMB8157ATCC79531.5-3.0min生孢梭菌孢子Clostrid

4、iumsporogenesNCTC8594NCIMB8053ATCC79550.4-0.8min干热灭菌法枯草芽孢杆菌BacillussubtilisNCIMB8058ATCC9372>1.5min去热原验证时加大肠杆菌内毒素(Escherichiacoliendoxin)辐射灭菌法短小芽孢杆菌BacilluspumilusNCTC10327NCIMB10692ATCC271423kGy短小芽孢杆菌孢子可用于监控灭菌过程，但不能用于灭菌辐射剂量的建立气体灭菌法枯草芽孢杆菌BacillussubtilisNCTC10073ATCC

5、9372>2.5min环氧乙烷灭菌嗜热脂肪芽孢杆菌BacillusstearothermophilusNCTC10007NCIMB8157ATCC795312980气态过氧化氢灭菌过滤除菌法缺陷假单胞菌PseudomonasdiminutaATCC19146用于滤膜孔径为0.22μm的滤器黏质沙雷菌SerratinmarcescensATCC14756用于滤膜孔径为0.45μm的滤器湿热灭菌法指将物品置于灭菌柜内利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。须保证物品灭菌后的SAL≤1

6、0-6对热稳定的物品，可采用过度杀灭法，其SAL应≤10-12适用范围药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其它遇高温和潮湿不发生变化或损坏的物品常用的生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌孢子(SporesofBacillusstearothermophilus，NCTC10007、NCIMB8157、ATCC7953)D值为1.5～3.0min生孢梭菌孢子(SporesofClostridiumsporogenes，NCTC8594、NCIMB8053、ATCC7955）D值为0.4～0.8min生物指示剂的选择干热灭菌法指物品于干热灭菌

7、柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。保证灭菌后的产品其SAL≤10-6干热过度杀灭后产品的SAL应≤10-12耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品的灭菌，如玻璃器具、金属制容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等适用范围枯草芽孢杆菌孢子(SporesofBacillussubtilis，NCIMB8058、ATCC9372)常用的生物指示剂D值大于1.5min生物指示剂的选择气体灭菌法指用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方法。在充有灭菌气体的高压腔室内进行。常用气体：环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛等环

8、氧乙烷法灭菌原理：强氧化，其分子作用于菌体后，能与菌体蛋白、核酸和酶中的—COOH、—NH2、—SH、—OH等基团起反应，而使菌体死亡。具有杀菌谱广，灭菌能力强的特点，对微生物的繁殖体、芽孢有较强的杀灭效果。适用范围塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固体药料及医疗