压力蒸汽灭菌生物指示剂使用中应注意的问题.doc

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1、压力蒸汽灭菌生物指示剂使用中应注意的问题一、术语解释1、载体：实验微生物的支持物2、指示菌：可代替相应致病菌抗力水平的非致病菌，通常使用指定的国际标准菌株或国家认定的标准菌株。3.存活时间（ST）：用于生物指示物抗力鉴定时，指受试的指示物样本，经杀菌因子作用后全部样本有菌生长的最长作用时间（min）。4.杀灭时间（KT）：用于生物指示物抗力鉴定时，指受试的指示物样本，经杀菌因子作用后全部样本无菌生长的最短作用时间（min）。5.Q值：杀灭微生物数量达90%所需的时间（min）。6.杀灭率：在微生物杀灭实验中，用百分率表示微生物数量减少的值。7.菌落

2、形成单位（cfu）：在活菌培养计数时，由单个菌体或聚集成团的多个菌体，在固体培养基上生长繁殖所形成的集落，称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量，一般一个菌落形成单位代表一个菌。8.活菌计数法：测定每毫升液体中含活菌的数量，是消毒效果检测试验中基本的微生物操作技术之一。二、使用1.消毒实验操作必须树立严格的无菌观念，一是保证人员安全，防止实验室感染，二是保证实验质量，防止实验污染。2.压力蒸汽灭菌效果监测方法可分为物理法有留点温度计测定法、温度记录仪、定时计；化学法有指示卡监测法、化学指示菌管、化学指示胶带：生物法有生物指示剂包括嗜热脂肪杆菌（Atc

3、c7953）芽孢生物指示剂（又称自含式生物指示剂）和生物指示剂菌片。3.按照国家标准和国家标准规定嗜热脂肪杆菌芽孢菌片回收菌量为5.0×105cfu/片（ml）～5.0×106cfu/片（ml）,在饱和蒸汽作用下，存活时间（st）≥3.9min,杀灭时间（kt）≤19min,D值1.3min-1.9min.4.压力蒸汽灭菌生物指示剂主要用于121℃下排气式压力蒸汽灭菌器、132℃～134℃预真空或脉动真空压力蒸汽灭菌器、134℃～136℃台式或卡式蒸汽灭菌器灭菌效果监测。5.压力蒸汽灭菌用的指示菌为嗜热脂肪杆菌（Atcc7953）芽孢，干热与化学消

4、毒剂用指示菌为枯草杆菌黑色变种（Atcc9372）芽孢。三、常见问题1.消毒试验指示菌选择的条件？答：（1）指示菌对杀菌因子的抗力应大于或等于所代表的同一类致病菌，易抗力，稳定，易储存。   （2）对营养条件要求不高，在普通培养基上生长。   （3）在形态上或培养特征上易辨认，易于其他菌区别。   （4）对人与动物基本无致病性。   （5）培养与制备可达标准化。2.压力蒸汽灭菌生物指示剂（菌管和菌片）生物指示剂经压力蒸汽灭菌处理后，置56℃培养为阳性原因何在？ 答：可能的原因为：（1）压力蒸汽灭菌器性能不合格。如新购的设备性能不稳定，未做B-D试验

5、即用，旧的设备未定期检修，指示温度和压力与灭菌器内实际温度和压力不一致。（2）压力蒸汽灭菌工艺不当。如装置满载或超过2/3，装放方式不合理，包装容器影响蒸汽穿透或冷空气的排出，冷空气未排净等。（3）生物指示剂的杀菌量超标，指示菌抗力太强。（4）恢复培养基未按产品使用手册或消毒技术规范上规定的配方设备，PH值＜7.2或＞7.5。3.压力蒸汽灭菌生物指示剂菌管正常培养时对照菌管培养液为什么不变为黄色？ 答：可能的影响因素为：（1）指示菌未能与恢复培养基充分接触。灭菌处理后，用特殊工具夹碎玻管使恢复培养基与菌片接触后，应未充分振摇，使菌片上的指示菌能与恢

6、复培养基充分接触。（2）灭菌处理时破坏恢复培养基中的葡萄糖，使指示菌在繁殖时不能分解葡萄糖产酸反应恢复培养基只能在115℃饱和蒸汽灭菌30min,若在121℃饱和蒸汽下灭菌30min则易破坏恢复培养基中的葡萄糖。（3）恢复培养基的PH值＜7.2或＞7.5导致嗜热脂肪杆菌芽孢不能正常生长繁殖。4.回收指示菌片的菌量时应注意什么？答：在回收菌片含菌时，应先将菌片置于回收液中浸泡30min，充分振打，直到滤纸分片后，滤纸上的指示菌完全洗下再进行活菌计数。如把菌片置于回收液试管中即刻振打80次或置灭菌平皿回收液内旋转200次，不能使滤纸菌片上的细菌芽孢完全

7、洗下，其回收菌量也达不到标准。