灭菌用生物指示剂指导原则（新增）

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1、第一次征求意见稿灭菌用生物指示剂指导原则（新增）生物指示剂是一种对特定灭菌程序有确定及稳定的耐受性的特殊微生物制成品，可用于灭菌设备的性能确认、特定物品的灭菌工艺研发及建立、产品灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控、灭菌程序的定期再验证、隔离器和无菌洁净室灭菌效果的验证评估等。生物指示剂的分类生物指示剂主要有以下三种类型，其特征需符合《医疗保健产品灭菌生物指示物》GB18281-的要求。（1）由微生物芽胞和载体经包装而成，载体可以是碟形或条状的滤纸、玻璃、塑料或其它材料。载体和内层包装不得含有物理、化学或微生物的污染

2、物，避免影响生物指示剂的性能和稳定性；不得被特定的灭菌工艺降解；能被灭菌介质（蒸汽、射线、化学试剂、过滤等）穿透并使灭菌介质与生物指示剂能充分接触。载体和包装的设计应保证生物指示剂不受污染、并使其所含的微生物在贮存、运输和使用过程中损失最小，且方便取样、转移和接种。（2）芽胞悬液生物指示剂，该类生物指示剂是将芽胞混悬于液体中。若用于液体物品灭菌，建议测定生物指示剂在灭菌液体物品中的芽胞数、D值和Z值。（3）自含式生物指示剂，该类生物指示剂是由芽孢和能够恢复微生物生长的培养基组成的系统。系统中的培养基用于培养灭菌后的生物

3、指示剂，应制定程序确认该培养基能保证残存微生物的生长。自含式生物指示剂的耐受性是针对整个系统而言。自含式系统所采用的材料不应该含有或在使用过程释放出抑制残存微生物生长的物质。该系统的设计应能够承受运输和使用过程中的影响，不发生破损，并使原始接种的微生物损失减少到最小。生物指示剂用微生物的基本要求生物指示剂含有对灭菌模式有明确耐受性的一种或两种微生物。除了电离辐射外，微生物芽孢较菌体有更强的耐受性。一般认为含芽胞的细菌更适合用于制备生物指示剂。第一次征求意见稿不同灭菌工艺使用不同的生物指示剂，制备生物指示剂所选用的微生物

4、应具备以下特征：（1）菌种的耐受性应大于需灭菌物品中所有可能污染菌的耐受性。（2）菌种应无致病性。（3）菌株应稳定，存活期长，易于保存。（4）易于培养。生物指示剂的芽胞含量要在90%以上生物指示剂的制备生物指示剂应按程序进行制备和质控。制备前，需先确定所使用微生物的特性。制备生物指示剂时，将所用的微生物在适宜条件下进行大规模培养、收集和纯化，然后将休眠（未萌发状态）芽胞悬浮于无营养的液体中保存。生物指示剂应避免其它微生物的污染，制备后需进行各性能参数测定。应建立和保存相关的微生物鉴定和制备记录，包括菌株来源，鉴别，与生

5、物指示剂直接相关的材料和成分的溯源记录，传代次数，培养基和其制备方法，以及热处理前后数据，芽胞的耐受性（D值和Z值）等信息。商品化的生物指示剂应具备详细的生物指示剂的性能特征和使用说明，包括明确其可用于何种灭菌程序、灭菌后的微生物培养条件和培养基、对灭菌程序的耐受性包括D值，D值测定方法、效期内的微生物总数和耐受稳定性，以及储存条件（包括温度，相对湿度和其它储存要求）、有效期和使用后的废弃措施等信息。用户亦可根据需求选择可作为生物指示剂的微生物自制供内部使用的生物指示剂。用户应确定自制生物指示剂的纯度、芽胞数、D值等参

6、数，并制定有效期，以保证灭菌验证和监控的有效性。生物指示剂应在标签条件或验证条件下进行储存，避光，远离毒性物质，防止过热和潮湿。生物指示剂的应用生物指示剂的性能评估在灭菌程序的验证中，生物指示剂的被杀灭程度，是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。第一次征求意见稿用户应根据使用目的制定商品化生物指示剂的验收标准，以保证生物指示剂的性能符合相关要求。在生物指示剂验收前，可考虑对D值进行评估，必要时可进行D值测定，确认D值和微生物数量的稳定性对于长期存放的生物指示剂尤为重要。接收商品化生物指示剂时，应进行微生物纯度和形态的鉴

7、定及测定微生物数量。生物指示剂应在有效期内使用，必要时应重新进行耐受性检查。自制的生物指示剂的性能应符合应用的要求。生物指示剂的选择用户应根据特定的灭菌工艺选择适宜的生物指示剂。生物指示剂对灭菌过程的挑战必须超出产品内外的自然微生物负荷量及耐受性的挑战，以保证灭菌程序有更大的安全性。湿热灭菌法：湿热灭菌工艺常用的生物指示剂为嗜热脂肪地芽胞杆菌（Geobacillusstearothermophilus）。其他耐热芽胞菌，如生孢梭菌（Clostridiumsporogenes），枯草芽胞杆菌（Bacillussubtil

8、is）和凝结芽胞杆菌（Bacilluscoagulans）的生物指示剂也被用于湿热灭菌工艺的建立和验证。干热灭菌法：干热灭菌工艺，一般使用枯草芽胞杆菌生物指示剂（Bacillussubtilis）进行验证，但更多则采用去热原方法加以验证，因为去热源所需的温度远高于灭菌温度。电离辐射法：评价辐射灭菌工艺曾采用短小芽胞杆菌（Bacil