乙型肝炎病毒宫内感染及其相关因素探究

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1、乙型肝炎病毒宫内感染及其相关因素探究【摘要】目的探讨孕妇血清乙型肝炎病毒（HBV）标志物与胎儿宫内感染发生的关系。方法将62例HBsAg阳性孕妇及其胎儿为观察组，60例HBsAg阴性孕妇及其胎儿为对照组。用酶联免疫吸附法（ELISA）检测两组孕妇血清HbsAg.HBeAg.及经利凡诺尔引产的胎儿心脏血清HBsAg,用Southern印记杂交法检测两组孕妇血清HBV—DNA和胎儿肝细胞HBV—DNA。结果观察组62例HbsAg阳性孕妇血清中，HBeAg阳性26例，HBV—DNA阳性44例；其胎儿HB

2、sAg阳性9例（14.52%）,HBV—DNA阳性10例（22.73%b对照组60例HBsAg阴性孕妇血清中，HBeAg阳性4例，HBV—DNA检测结果均为阴性。其胎儿HBsAgl例（1.67%）,HBV—DNA检测结果均阴性。胎肝HBV—DNA的整合与孕妇HBV—DNA存在相关（x2=4.88,P<0.05b结论HBV可以进入宫腔内感染胎儿，同时证明孕妇HBeAg和HBV—DNA阳性是胎儿宫内感染HBV的高危因素。【关键词】乙型肝炎病毒；宫内感染；高危因素1资料与方法1.1研究对象2009年3月

3、一20"年6月间在河南郑州、鹤壁两个地区中的三个市级医院收集62例妊娠中、晚期HBsAg阳性的孕妇及其经利凡诺尔引产的62例死胎作为研究对象，同时设60例对照，孕妇除HBsAg阴性外，其余条件与观察组相似。1.2标本采集胎儿娩出后，立即清洗其胸腹部皮肤，经胸壁心脏穿刺采集心血5ml，并抽取孕妇静脉血5—10ml,分离血清，置—20°C保存。同时，采集胎儿肝脏标本10—20g置液氮保存。1.3方法1.3.1血清学检测孕妇血清HBsAg、HBeAg及胎儿血清HBsAg检测均采用酶联免疫吸附法(ELIS

4、A试剂盒购自上海科华实业有限公司，严格按照说明书操作。以P/Nm>2.i判为阳性。1.3.2HBVDNASouthern印迹杂交①DNA制备：孕妇血清DNA及胎肝DNA的提取参照王申五等方法；©HBVDNA全基因探针的制备及标记：从含HBV全基因组的重组质粒中分离纯化制备探针，并用地高辛(Dig—11—dulP)标记(华美生物制品有限公司试剂盒)；③DNA的酶解与Southern印迹杂交:10pgDNA样品加100pgEcoRI限制性内切酶379温育4—6h,将酶解产物在1%琼脂糖凝胶中电泳18

5、—20h,电压1.5v/cmo分子量标志用入DNA/hindlll。用重组质粒PcpIO酶切、分离纯化的HBVDNA(3・2kb)做阳性对照。电泳完毕，凝胶经酸化、变性、中和处理，按王申五等方法将疑胶中的DNA真空转移到尼龙膜上。689预杂交lh杂交（Dig—11—dUTP标记的探针）6h,室温洗膜两次，各15min,68°C洗膜两次，各15mino将膜于地高辛一抗体—碱性磷酸酶显色体系中进行显色反应，当出现带时，终止反应，观察结果，照相O1.4统计学方法采用卡方检验法。2结果2.1孕妇血清与胎心

6、血清HBV标志物检测结果观察组62例HbsAg出阳性母血中,HbeAg阳性26例,HBVDNAHbsAg阳性44例；在62例胎儿中,HbsAg阳性9例,HBVDNA阳性10例。对照组60例HbsAg阴性母血中，HbeAg阳性4例，HBVDNA检测结果均阴性：在60例胎儿中，HbsAg阳性1例，HBV的DNA检测结果均阴性。2.2HbsAg阳性胎儿与母亲HbsAg和/或HBeAg阳性的关系。2.3胎肝HBVDNA整合状态及其与母亲血清HBV标志物的关系62例HBsAg阳性母亲的胎儿中，10例胎肝细胞

7、DNA用EcoR1酶解，再与地高辛标记的HBVDNA探针杂交后，出现大于3.2Kb的HBVDNA特异杂交带。由于HBVDNA在细胞基因组中没有固定的位点，故表现岀HBVDNA整合基因序列不同。62例HBsAg阳性母亲，有44例检测岀不同序列的大于3.2Kb的HBVDNA特异杂交带。观察组其他样本及对照组全部样本均未检测出HBVDNA整合带。观察组HBVDNA阳性母亲的胎儿较HBVDNA阴性母亲的胎儿更易发生宫内感染。胎儿肝细胞HBVDNA整合状态与母血清标志物的关系。在10例胎肝HBVDNA阳性中

8、，其HBsAg均为阳性。关于HBV能否经胎盘感染胎儿，曾长期存在着分歧。但有研究证明妊娠期间患有急性乙肝的母亲易发生母婴传播。通过检测HBsAg阳性孕妇流产或引产死胎的胎肝或胎心血测到HBV感染标记物，国内外资料报道乙型肝炎病毒发生宫内感染率达13%—44%O在我们的研究中，HBsAg阳性孕妇的胎儿HBV宫内感染率达14.5%，与对照组HBsAg阴性孕妇相比，有显著差异(P<0.05),证实了宫内感染的存在。在决定母婴是否发生的母方因素中，母血HBeAg是否阳性是一个重要因素。HB