KJ 201907 液体乳中三聚氰胺的快速检测 胶体金免疫层析法

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1、附件7液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201907)1　范围本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。2　原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中三聚氰胺进行定性判定。3　试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1　试剂3.1.1甲醇。3.1.2三羟甲基氨基

2、甲烷（Tris）。3.1.31mol/L盐酸：移取83mL浓盐酸，加入900mL水中，定容至1L。3.1.4甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。3.1.5稀释液：准确称取6.05gTris（3.1.2）和8.5g1mol/L盐酸（3.1.3），加水定容至1L，混匀后备用。3.2　参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。表1三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量三聚氰胺Melamine108-78-1C3H6N6126.12

3、注：或等同可溯源物质。3.3　标准溶液的配制三聚氰胺标准储备液（1000μg/mL）：精密称取适量三聚氰胺标准品（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000μg/mL的三聚氰胺标准储备液；或可直接购三聚氰胺标准储备液。4℃避光保存备用，有效期3个月。—6——1.1　三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒1.1.1　金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。1.1.2　试纸条或检测卡。2　仪器和设备2.1　移液器：200µL、1000µL和5mL。2.2　涡旋混合器。2.3　电子天平：感量为0.01g。2.4　环境条件：温度15℃~

4、35℃，湿度≤80%。3　分析步骤3.1　试样制备取适量有代表性样品充分混匀。3.2　试样提取准确称取样品0.5g于离心管中，加入5mL稀释液（3.1.5），涡旋混匀提取5min，即得待测液。注：试样提取过程可按照试剂盒说明书，不做限定。3.3　测定步骤3.3.1　试纸条与金标微孔测定步骤吸取150~200μL样品待测液于金标微孔（3.4.1）中，抽吸5~10次使混合均匀，不要有气泡，40℃温育3min，将检测试纸条（3.4.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，40℃温育5min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。3.3.2　检测卡测定步骤吸取150-200μL样品待测液于检

5、测卡加样孔（3.4.2）中，室温反应3-5min，进行结果判定。3.4　质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。3.4.1　空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。3.4.2　加标质控试验准确称取空白试样100g（精确至0.01g）置于100mL玻璃溶液瓶中，加入250μL三聚氰胺标准溶液（1000μg/mL）（3.3），使试样中三聚氰胺浓度为2.5mg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。注：可参考标准品的说明书配置操作。4　结果判定要求通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视结果判读如图1。4.1　无效控制

6、线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。4.2　阳性结果—6——1.1.1　消线法检测线（T线）不显色，控制线（C线）显色，表明样品中三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。1.1.2　比色法检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅或几乎不显色，表明样品中三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。1.2　阴性结果1.2.1　消线法检测线（T线）、控制线（C线）均显色，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，判定为阴性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。1.2.2　比色法检测线（T线）颜

7、色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，判定为阴性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。—6——试纸条手持端C线T线样品端检测卡加样孔T线C线C线T线T线T线C线C线阴性阳性阳性阴性消线法比色法结果无效检测装置示意图图1试纸条/检测卡目视判定示意图1.1　质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。1.2　读数仪测定法按读数仪说明书要求操作直接读取并进行结果判定。2　结论三聚氰胺与灭蝇胺有交叉反应，当检测结果为阳性时，应