KJ 201707 食品中吗啡、可待因成分的快速检测胶体金免疫层析法

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1、附件1食品中吗啡、可待因的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201707）1范围本方法规定了食品中吗啡、可待因的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于经调味料、火锅底料、麻辣烫底料或其他食用汤料等勾兑、调配或添加形成的液体食品；经调味酱、调味油脂、火锅底料、麻辣烫底料、蘸料或其他调味料等勾兑、调配或添加形成的半固体食品，酱油；经香辛香料、复合调味料等勾兑、调配或添加形成的固体食品，食用醋（含以食用醋为主的调味料）中吗啡、可待因的快速测定。2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的吗啡、可待因经水提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和

2、检测线（T线）上抗原的结合，导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中吗啡、可待因进行定性判定。3试剂与材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。3.1试剂甲醇。3.2参考物质吗啡、可待因参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度均≥99%。表1吗啡、可待因参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量1吗啡Morphine57-27-2C17H19NO3285.34C18H21N

3、O3•H3PO42磷酸可待因CodeinePhosphate41444-62-6424.39•3/2H2O注：或等同可溯源物质。—1——3.3标准溶液配制3.3.1吗啡、可待因标准储备液（1mg/mL）：精密称取适量吗啡、可待因参考物质（3.2），用甲醇（3.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为1mg/mL的吗啡、可待因标准储备液。-20℃避光保存，有效期1年。3.3.2吗啡、可待因标准中间液（10μg/mL）：精密移取吗啡、可待因标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）1mL分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1）稀释至刻度，摇匀

4、，制成浓度为10μg/mL的吗啡、可待因标准中间液。-20℃避光保存，有效期3个月。3.3.3吗啡、可待因标准工作液（1μg/mL）：精密移取吗啡、可待因标准中间液（10μg/mL）（3.3.2）1mL分别置于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的吗啡、可待因标准工作液。4℃避光保存，有效期1个月。3.4材料吗啡、可待因胶体金免疫层析检测卡，及配套的试剂（可选），适用基质为食品。4仪器和设备4.1天平：感量为0.01g。4.2读数仪：产品配套可使用的检测仪器（可选）。4.3环境条件：温度10—40℃，相对湿度≤80%

5、。5分析步骤5.1试样制备取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混匀。5.2试样提取和净化5.2.1液体食品：吸取试样（尽量避免吸取油脂层）测定。层析展不开时，用0.45µm微孔滤膜过滤后测定。5.2.2半固体食品及酱油：准确称取试样1g±0.1g于15mL具塞离心管中，加2—3mL水，大力振摇至均匀（必要时置约70℃水浴加热），静置5—10min，吸取水层（尽量避免吸取油脂层或沉淀）测定。层析展不开时，用0.45µm微孔滤膜过滤后测定。5.2.3固体食品及食用醋：准确称取试样1g±0.1g于15mL具塞离心管中，加8—1

6、0mL水，大力振摇1—2min至均匀，静置5—10min，吸取水层测定。层析展不开时，用0.45µm微孔滤膜过滤后测定。注：试样提取和净化（5.2）过程可按照试剂盒说明书，不做限定。5.3测定步骤测试前，将未开封的检测卡恢复至室温。缓慢滴加3—4滴待测溶液至检测卡加样孔中，静置，5—10min内对结果进行判定。注：测定步骤建议按照试剂盒说明书。—2——5.4质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。5.4.1空白试验：准确称取空白试样1g±0.1g，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。5.4.2加标质控试验：称取空白试样，分别添加适

7、量标准工作液（3.3.3），使液体、半固体试样或酱油试样中吗啡、可待因含量均为40µg/kg，使固体或食用醋试样中吗啡、可待因含量均为100µg/kg，按照5.2和5.3步骤与试样同法操作。注：根据每次试验时的基质类型做相应的基质加标质控试验。6结果判定要求采用目视法对结果进行判定，示意图如图1和图2所示。结果判定也可使用胶体金读数仪，具体操作与判定原则参照读数仪使用说明书。结果判定建议按照试剂盒说明书。6.1比色法6.1.1无效控制线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，表示操作不正确或检测卡已失效。6.1.2阴性结果控制线（C线）显

8、色，检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，均表示样品中不含吗啡、可待因或含量低于方法检测限，判为阴性。6.1.3阳性